Co-IP實驗的外源檢測是一種通過引入外源表達的蛋白來驗證蛋白質間相互作用的方法。與外源檢測相對的是內源檢測，即檢測細胞內自然狀態下蛋白質間的相互作用。在外源檢測中，研究者通常會在細胞中轉染含有特定基因的質粒，使該基因在細胞內過量表達，從而產生大量的外源蛋白。然后，利用特異性抗體對這些外源蛋白進行免疫共沉淀（Co-IP），并通過Western Blot等技術檢測與其相互作用的蛋白是否也被沉淀下來。這種方法有助于驗證蛋白質間的相互作用，并確定相互作用的具體條件或影響因素。同時，由于外源蛋白的表達量較高，因此外源檢測通常比內源檢測更為敏感，更容易檢測到較弱的相互作用。然而，需要注意的是，外源檢測的結果可能受到多種因素的影響，如外源蛋白的表達水平、轉染效率、細胞狀態等。因此，在進行外源檢測時，需要嚴格控制實驗條件，確保實驗結果的準確性和可靠性。同時，為了更好地了解蛋白質間的相互作用，通常需要結合內源檢測和外源檢測的結果進行綜合分析。免疫共沉淀法特異性強、可控性高，可用于研究蛋白互作，反映天然狀態，可逆且操作簡便。河北CoIP-Western Blot
Co-IP（共免疫沉淀）常用于研究蛋白質之間的相互作用。當你想探究兩個或多個蛋白質是否在細胞內形成復合物，或者驗證某個蛋白質是否與你感興趣的蛋白質有相互作用時，就會用到Co-IP。如果你正在研究一個未知的蛋白質功能，并且懷疑它可能與已知的某個蛋白質有相互作用，那么你可以使用Co-IP來驗證這種相互作用。通過共轉染或共表達這兩個蛋白質，并使用針對其中一個蛋白質的抗體進行免疫沉淀，你可以檢測另一個蛋白質是否被共沉淀下來，從而驗證它們之間的相互作用。此外，Co-IP還可以用于研究信號轉導通路中的蛋白質復合物，以及蛋白質在細胞內的定位和功能。四川互作機制CoIP Mass檢測IP-Mass技術結合免疫沉淀與質譜分析，研究蛋白互作與差異分析，但需注意其局限性與驗證！
免疫共沉淀也存在一些局限性。例如，它可能無法檢測到低親和力和瞬間的蛋白質-蛋白質相互作用。此外，兩種蛋白質的結合可能不是直接結合，而可能有第三者在中間起橋梁作用。此外，實驗前需要預測目的蛋白以選擇相應的抗體，因此，如果預測不正確，實驗可能無法得到結果，這使得這種方法具有一定的冒險性。總的來說，免疫共沉淀是一種強大的技術，它能夠為我們提供關于蛋白質相互作用的寶貴信息。然而，為了得到準確和可靠的結果，我們需要謹慎地解釋和分析實驗數據，并考慮到這種方法的局限性。
Co-IP（免疫共沉淀）實驗的內源檢測是驗證蛋白質相互作用的關鍵步驟。內源檢測的目的是確認在細胞內自然狀態下，目標蛋白與預測相互作用的蛋白是否真實存在相互作用。內源檢測的成功與否直接關系到Co-IP實驗結果的可靠性。如果內源檢測結果陽性，說明目標蛋白與預測相互作用的蛋白在細胞內真實存在相互作用，這為后續的蛋白質功能研究和藥物開發提供了重要的線索和依據。需要注意的是，內源檢測可能受到多種因素的影響，如抗體特異性、細胞裂解條件、洗滌條件等。因此，在進行Co-IP實驗時，需要嚴格控制實驗條件，選擇特異性強的抗體，并進行充分的洗滌步驟，以確保內源檢測結果的準確性和可靠性。CoIP實驗操作要點主要包括哪些。
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是一種基于抗原與抗體特異性結合用于研究蛋白質與蛋白質相互作用的方法。常用于候選目標蛋白質之間是否有相互作用，也用于確定與已知蛋白質互作的其它未知蛋白質相互作用。基本原理：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。用蛋白質A的抗體免疫沉淀A，那么與A互作的蛋白質也能沉淀下來，此時獲得與A互作的蛋白復合物。若已知AB互作，則用蛋白復合物進行WB實驗檢測B；若鑒定蛋白復合物中有哪些蛋白，則對復合物進行質譜檢測。免疫共沉淀實驗流程：蛋白質樣本收集-A抗體沉淀目的蛋白A-SDS-PAGE分離-WB檢測B蛋白或者質譜鑒定互作蛋白。免疫共沉淀法可信度高，可發現新蛋白搭檔，但存局限，需結合其他方法驗證。重慶相互作用蛋白檢測CoIP-WB
Co-IP外源檢測靈敏可控但難模擬體內環境，內源檢測真實但背景復雜，選擇需權衡實驗目的！河北CoIP-Western Blot
IP-WB（免疫沉淀-Western Blot）實驗流程主要包括以下步驟：樣品制備：收集細胞或組織樣品，進行適當的裂解處理，以釋放細胞內的蛋白質。免疫沉淀：將特異性抗體與目標蛋白結合，形成抗原-抗體復合物。隨后，將復合物與固相載體（如磁珠）結合，通過洗滌去除非特異性結合的雜質。電泳分離：將免疫沉淀得到的蛋白質復合物進行SDS-PAGE凝膠電泳，根據分子量大小將蛋白質分離成不同的條帶。轉膜：將凝膠上的蛋白質轉移到固相膜上，以便進行后續的Western Blot檢測。Western Blot檢測：利用特異性抗體檢測目標蛋白或其相互作用伙伴的存在。通過顯色反應可視化目標蛋白，觀察并記錄結果。以上步驟完成后，可以對Western Blot結果進行分析，從而驗證蛋白質之間的相互作用情況。河北CoIP-Western Blot