一般來說,生物生產工藝用的核酸酶以BenzonaseTM(BenzonaseTM是Merck的注冊商標)為主,能高效降解任何形式(雙鏈、單鏈、線狀、環狀)的DNA和RNA。該酶來自于大自然界普遍存在的S.Marcescen,通過E.coli發酵生產得到。該酶的適宜反應條件是低鹽濃度范圍(<100mM鹽濃度),且酶活隨著鹽濃度上升而下降,在300mM鹽濃度時酶活幾乎喪失。對于細胞基因藥物常用的兩種病毒載體LV和AAV,LV由于含有脂包膜結構一般都在生理鹽條件下存在,而AAV在高鹽條件下不易團聚、更穩定。而在生理鹽濃度及更高濃度條件下,Benzonase活性受到抑制。ArcticZymes廠家管控整個供應鏈及生產流程,協助客戶進行文件審計及現場審計。海南培養基條件中鹽核酸酶
宿主細胞DNA(HCD)殘留以染色質形式存在,其中有帶負電荷的DNA、帶正電荷及疏水區段的組蛋白,就像膠帶一樣能夠吸附很多物質,包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白,會影響蛋白雜質(如HCP)等的去除;吸附到色譜填料上,會降低色譜分離純化效率;吸附到目的病毒顆粒時,會影響目的產物的穩定性,從而降低目的產物的得率。因此,從生產工藝層面來講,一定要去除HCD,從而能夠簡化工藝、提高目的產物的產量。北京中鹽核酸酶70950ArcticZymes精于規模化生產獨特特性的酶產品,于2005年在證券交易所上市。
慢病毒載體既可以轉導分裂細胞也可以轉導非分裂細胞,被認為是安全的,并且可以提供長期的轉基因表達,是目前較通用的基因轉移方法之一。因慢病毒載體能有效地轉導靶細胞,如造血干細胞和T細胞,在細胞和基因藥物中的應用越來越guang泛。源自人類胚胎腎細胞的HEK293細胞系是成熟的生產LV的系統,因為它們非常適合懸浮培養并且易于轉染。在無血清培養基中的懸浮培養在大規模生產中具有優勢,因為它消除了批次之間的差異并降低了不定因子污染的風險。
ArcticZymes產品廣泛應用于藥物生產、分子研究、體外診斷等領域。例如,在藥物生產領域,鹽活性核酸酶(SANs)系列產品用于細胞基因藥物及Vaccine的virus載體生產過程。在分子研究領域,蝦堿酶(SAP)、DNA酶(Dnase)、蛋白酶(AZ Proteinase)、連接酶(R2D Ligase)等用于頭部Life Science品牌的科研kit中。在體外診斷領域,等溫擴增酶、UNG酶、蛋白酶等產品應用于國際TOP診斷公司的生產流程中。此外,ArcticZymes專注于開發更好的解決方案,不斷超越合作伙伴的期待,從而與合作伙伴建立牢固可靠的關系。瓊脂糖膠結果顯示,M-SAN HQ中鹽核酸酶能將HCD消化成小于8nt的片段。
逆轉錄病毒載體可以將7.5Kb左右外源基因整合入靶細胞基因組,并穩定持久地表達,已經在批準的CAR-T產品和許多臨床產品中得到應用。Shou個成功的基因藥物臨床試驗是利用小鼠白血病病毒(Murin Leukemia Virus,MLV,gamma逆轉錄病毒)作為基因轉移載體醫治兒童的X性染色體連鎖嚴重聯合免疫缺陷(SCID-X1)。目前上市的6個細胞藥物產品全部采用逆轉錄病毒(3個為gamma逆轉錄病毒載體,3個慢病毒載體)作為基因轉移載體。逆轉錄病毒載體目前常用的主要有兩個:gamma逆轉錄病毒載體(Retroviral vector,RV)和慢病毒載體(Lentivirus vector,LV)。兩種病毒均屬于逆轉錄病毒科,在自身攜帶的逆轉錄酶催化下將其正鏈RNA均逆轉錄為cDNA。病毒顆粒比較大,約為100nm(70-100nm,有的至200nm),外層為表面突起的脂蛋白套膜,套膜內為20面體的衣殼(capsid),核衣殼內由一螺旋結構的核酸。ArcticZymes的產品開發、生產、銷售和營銷過程均通過ISO13485質量標準的認證。重慶M-SAN中鹽核酸酶
M-SAN HQ ELISA kit檢測產品操作簡單,1.5–2hr即可完成檢測。海南培養基條件中鹽核酸酶
在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA(HCD),并將其分解成足夠小的片段,以便在下游純化過程中去除。雖然大多數核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,但實際生產中的核酸污染情況更加復雜。HCD通常以染色質形式存在,與細胞裂解碎片、病毒顆粒等結合在一起,影響核酸酶的識別及剪切。因此,HCD去除的關鍵在于——核酸酶如何在復雜的生產體系中識別并剪切HCD。海南培養基條件中鹽核酸酶