EdU法中的點擊反應原理圖。摻入到細胞DNA中的EdU與熒光探針或生物素等標記的疊氮化物,在銅離子的催化下發生共價反應,形成穩定的三唑環,使細胞DNA標記上熒光探針或生物素。細胞增殖檢測是評估細胞活性、遺傳毒性及抗藥物效果等的基礎實驗手段。細胞增殖檢測的方法按照原理通常可以分為五類:膜損傷檢測、代謝活性檢測、ATP水平測定、DNA合成檢測和細胞熒光標記檢測法。目前公認的精確的檢測細胞增殖的方法是直接檢測細胞中DNA的合成EdU細胞增殖檢測試劑盒如何發揮重要作用?天津品質好的EdU細胞增殖檢測試劑盒優勢
細胞增殖分析是細胞生長和分化研究的關鍵,在藥物開發階段常用來評估化學藥物的毒性和對細胞生長的控制作用。通常根據平均DNA含量或細胞代謝參數進行細胞增殖檢測,此類分析可以報告出總細胞數目和活細胞數目,或者測定出單個細胞內的DNA合成情況。細胞增殖染料稀釋分析主要基于細胞膜通透性,熒光團分子、染料進入細胞后,將會共價結合到蛋白質上的氨基基團上,從而使染料能夠長時間停留在細胞中。經過之后的細胞分裂階段,各個子代細胞會從母細胞中接收到大約一半的熒光染料。采用流式細胞儀對熒光強度進行分析,即可測定出自標記結合起,單個細胞或細胞群所經歷的傳代數目。天津品質好的EdU細胞增殖檢測試劑盒優勢上海東寰告訴您EdU細胞增殖檢測試劑盒哪家好?
EdU標記(a)將細胞完全培養基中按照500:1的比例加入EdU溶液,制成2xEdU標記培養基;(b)提前將2xEdU標記培養基預熱,然后等體積加入到細胞原有培養基中,獲得lxEdU溶液,其中EdU的終濃度為10uM;注:1)我們不建議替換全部培養基,因為這樣可能會影響細胞增殖的速度;2)配置好的培養基建議現用現配,用量以沒過細胞為宜;(c)每孔加入300ul含EdU培養基孵育細胞2小時,棄培養基;注:1)培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態;2)大多數**細胞以及粘附細胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細胞兩次,毎次5分鐘,以除去未摻入DNA的EdU殘留。注:貼壁不牢的細胞可降低清洗強度
細胞增殖是評價細胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標。EdU(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物,其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見,能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復制的DNA分子中,通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應,把記到新合成的含有EdU的DNA上面,這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復制活性,廣泛應用于細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA損傷修復等方面的研究。傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復、抗原抗體過夜孵育等復雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性,只需溫和的細胞固定化和透化處理,能夠較好地保護細胞形態、DNA整體結構及細胞內抗原識別位點,操作步驟更加快速、靈敏和準確。EdU細胞增殖檢測試劑盒使用時要考慮什么問題?
上海東寰活細胞能將四咪唑鹽(如MTT、XTT、WST-1)還原成有色的甲瓚或甲瓚鹽(Formazan),可通過分光光度計或酶標儀進行檢測。CellCountingKit–8(96992)和CellProliferationReagentWST-1中的WST-8被細胞內脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養基中,生成的甲臜量與活細胞數量成正比?;贑CK-8(WST-8)的試劑盒能高度準確地檢測細胞增殖,比MTT法及XTT法的靈敏度高5倍,能檢測更低的細胞數目。該試劑盒可適用于96孔板培養的貼壁或懸浮細胞。EdU細胞增殖檢測試劑盒對如今市場的影響。安徽品牌EdU細胞增殖檢測試劑盒供應商
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現在有一種新的檢測方法能避免這種情況的發生——EdU檢測。EdU(5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷類似物,但其連有的炔羥基團在天然化合物中很少見,在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以進行高效快速的細胞增殖檢測分析,可以有效地檢測處于S期的細胞百分數。與傳統的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,更簡單,更快速,更準確。EdU只有BrdU抗體大小的1/500,在細胞內更容易擴散,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。天津品質好的EdU細胞增殖檢測試劑盒優勢