寧波PCR法支原體檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-03-15

常用的支原體檢測(cè)方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)則靈敏度比較低,因背景熒光的存在,細(xì)胞輕度支原體污染不易檢出;細(xì)胞裂解死亡產(chǎn)生碎片也會(huì)被熒光染料染色被誤認(rèn)為是支原體染色所致造成假陽(yáng)性;另外,熒光染色法一般要求培養(yǎng)無(wú)污染的指示細(xì)胞作為對(duì)照,增加了檢測(cè)的工作量。目前,PCR法為主流的支原體檢測(cè)手段,PCR法比傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法檢測(cè)時(shí)間縮短,且靈敏度高。支原體檢測(cè)方法有哪些。寧波PCR法支原體檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前,對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA,以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的:去除抑制物質(zhì):某些樣品中可能含有對(duì)PCR或其他分子檢測(cè)方法有抑制作用的物質(zhì),如酶抑制劑、有機(jī)溶劑等。支原體DNA提取過(guò)程可以幫助去除這些抑制物質(zhì),提高后續(xù)PCR或分子檢測(cè)的成功率。保護(hù)DNA完整性:支原體DNA在樣品中容易受到外界環(huán)境的影響和降解。提取過(guò)程中的適當(dāng)處理可以保護(hù)DNA的完整性,防止其在提取過(guò)程中受到損傷。杭州快速支原體檢測(cè)公司支原體檢測(cè)的背景知識(shí)與法規(guī)要求。

我國(guó)藥典規(guī)定的支原體檢測(cè)方法為培養(yǎng)法和指示細(xì)胞染色法。但這些方法也存在一些不盡人意之處,如所需時(shí)間較長(zhǎng),有的操作復(fù)雜等。《中國(guó)藥典2020年版3301支原體檢測(cè)法》中指出:除培養(yǎng)法和DNA染色法外,也可采用經(jīng)國(guó)家藥品檢定機(jī)構(gòu)認(rèn)可的其他方法,對(duì)支原體進(jìn)行檢測(cè)。由于支原體檢測(cè)存在必要性,如何盡可能提高檢測(cè)的準(zhǔn)確率以及效率尤為關(guān)鍵。不少業(yè)內(nèi)指導(dǎo)原則指出,支原體的核酸法檢測(cè),通過(guò)嚴(yán)格且充分的方法學(xué)驗(yàn)證,可以替代藥典中對(duì)的培養(yǎng)法與DNA染色法。

常用的支原體檢測(cè)方法有傳統(tǒng)的分離培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法(DNA染色法)、ELISA法、PCR法等。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果,因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)也存在四個(gè)弊端,一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng),支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間;二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類(lèi),分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候,例如豬鼻支原體(M.hyorhinis);三是易出現(xiàn)假陽(yáng)性,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)時(shí)需以陽(yáng)性菌株為對(duì)照,易出現(xiàn)交叉污染;四是對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件要求比較高。被污染的細(xì)胞如何做支原體檢測(cè)?

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機(jī)環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)?①避免在不必要的情況下凍融試劑盒中的試劑,檢測(cè)試劑盒需避光儲(chǔ)存于-18℃以下;②本試劑盒所用的試劑不能隨意替換,以免影響檢測(cè)效果。不同批號(hào)的試劑盒各成分也不可相互混用;③嚴(yán)格區(qū)分質(zhì)控品和反應(yīng)試劑的使用,防止試劑的污染,導(dǎo)致假陽(yáng)性;④完成實(shí)驗(yàn)后用10%次氯酸或75%精或紫外燈處理工作臺(tái)與移液器。PCR相關(guān)實(shí)驗(yàn)中污染問(wèn)題時(shí)常發(fā)生,常見(jiàn)的有以下幾種污染類(lèi)型:擴(kuò)增產(chǎn)物的污染、天然基因組DNA污染、試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。擴(kuò)增產(chǎn)物污染是嚴(yán)重、難以處理的的污染類(lèi)型,由于一旦發(fā)生PCR產(chǎn)物污染,實(shí)驗(yàn)室必須停止實(shí)驗(yàn),直至污染被完全清    除為止,PCR產(chǎn)物污染短時(shí)間內(nèi)很難消除,一般需要2-4周才能消除,而且實(shí)驗(yàn)相關(guān)的試劑、耗材有很大可能會(huì)被污染,需全部更換。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測(cè)試劑盒試劑盒經(jīng)過(guò)精心開(kāi)發(fā),可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測(cè)反應(yīng)中產(chǎn)生擴(kuò)增,由此避免污染物帶來(lái)的檢測(cè)誤差,減少實(shí)驗(yàn)室污染造成檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的可能性。qPCR法支原體檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)有哪些?上海便捷支原體檢測(cè)注意事項(xiàng)

生物制品支原體檢測(cè)。寧波PCR法支原體檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題

隨著我國(guó)生物以及細(xì)胞治     療相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展,相關(guān)的法律法規(guī)也在不斷健全。支原體檢測(cè)就是其中必不可少的一項(xiàng)。準(zhǔn)確進(jìn)行支原體檢測(cè),是避免外源因子污染,保證產(chǎn)品質(zhì)量的重要質(zhì)控手段。南京正揚(yáng)生物科技有限公司的qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)體系(包括提取和檢測(cè))由全球蕞第三方實(shí)驗(yàn)室Eurofins權(quán)      威認(rèn)證,驗(yàn)證報(bào)告具備公正性、權(quán)     威性,達(dá)到歐洲典(EP2.6.7)和日本典(JPG3)要求。每個(gè)批次產(chǎn)品均有廠(chǎng)家的質(zhì)檢報(bào)告(COA)。寧波PCR法支原體檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題

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