RT-PCR逆轉錄中模板的選擇：在RT-PCR實驗中，選擇總RNA或純化的mRNA作為模板進行逆轉錄十分重要。mRNA雖然能提供略高的靈敏度，但總RNA經常使用，具有較mRNA更重要的優勢。首先，其過程需要較少的純化流程，這保證了更好的回收模板和更好的把結果標準化為起始的細胞數。第二，避免mRNA富集步驟，為了避免不同mRNA的回收率而帶來結果偏移的可能性。總之，在大多數的應用中，目標基因的相對定量比檢測的非常靈敏度更重要，因此在多數情況下，總RNA更適用。逆轉錄在病毒學、免疫學等領域有普遍的應用。杭州加尾法逆轉錄純度高
反轉錄酶的注意事項，引物的選擇，OligodT：選擇OligodT時，要求RNA必須有PolyA，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，所以對RNA樣品的質量要求較高，較好不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用OligodT引物。使用OligodT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。特異性引物：特異性引物只能用你設計引物時的下游引物做RT，引物設計質量影響RT的結果，而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以按照說明書按照一個溫度做不是較佳選擇，一般不推薦。帶gDNA Remover逆轉錄酶芯片檢測逆轉錄過程是病毒的復制形式之一，如RNA病毒中的逆轉錄病毒。
逆轉錄過程是病毒的復制形式之一，如RNA病毒中的逆轉錄病毒，DNA病毒中的擬逆轉錄病毒的復制均需要經過逆轉錄。逆轉錄過程在真核細胞中也同樣存在，例如逆轉座子和端粒DNA的延長均存在逆轉錄過程，需逆轉錄酶的催化，端粒酶即為真核細胞中的逆轉錄酶。逆轉錄過程的揭示是分子生物學研究中的重大發現，是對中心法則的重要修正和補充。人們通過體外模擬該過程，以樣本中提取的mRNA為模板，在逆轉錄酶的作用下，合成出互補的cDNA，構建cDNA文庫，并從中篩選特異的目的基因。該方法已成為基因工程技術中較常用的獲得目的基因的策略之一。
RNA逆轉錄實驗注意事項：RNA定量：除了掌握RNA的完整性之外，反轉錄之前還需要對RNA濃度進行測定。一般反轉錄試劑盒會對上樣量有要求，建議totalRNA上樣量小于5μg。超過這個范圍，會使反轉錄產物產生偏好性(表達豐度高的基因優先被反轉錄)而造成定量結果不準確。逆轉錄引物的選擇：逆轉錄引物一般包含3種：oligodT引物，隨機引物和特異性引物。對于短的且不具備發卡結構的真核細胞mRNA，三種都可用。逆轉錄實驗過程中避免光照，防止RNA樣品和試劑受光降解或刺激。逆轉錄技術應用于人類基因組的研究。
逆轉錄是指以RNA為模板合成DNA的過程，即將遺傳信息由RNA逆向傳給DNA的過程，其遺傳的傳遞方向與轉錄相反。反轉錄酶也可寫成逆轉錄酶又稱為依賴RNA的DNA聚合酶。是以RNA為模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。哺乳類C型病毒的反轉錄酶和鼠類B型病毒的反轉錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉錄酶則由兩上亞基結構。真核生物中也都分離出具有不同結構的反轉錄酶。RNA指導的DNA聚合酶活性；以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物，多為色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反轉錄酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由反轉錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。HIV病毒復制的一個重要步驟就是逆轉錄。蘇州miQP2逆轉錄混合哪家好
逆轉錄后的DNA可用于構建基因工程載體。杭州加尾法逆轉錄純度高
miRNA的加尾法逆轉錄和qPCR，miRNA與mRNA的在qRT-PCR過程有所不同。一般來講，mRNA比較長，其長度通常在幾百至幾千個核苷酸，因此使用隨機引物(RandomPrimerp(dN)6)即可隨機結合到mRNA的各位置進行逆轉錄。由于qPCR的過程只需擴增目的片段的一部分(80~200bp)，因此使用隨機引物的逆轉錄產物盡管不完整，也完全能夠滿足qPCR的需求。當然，也可以使用OligodT引物統一從mRNA的ployA尾巴開始逆轉錄。這種逆轉錄引物在擴增cDNA全長時是必須的，但要注意，原核生物的mRNA和某些lncRNA不具有ployA尾，因此不能使用OligodT引物進行逆轉錄。杭州加尾法逆轉錄純度高