除了畢赤酵母,還有幾種常用的表達系統可以用來提高重組蛋白的表達量和純度:1.大腸桿菌表達系統:大腸桿菌是常用的原核表達系統,具有遺傳背景清晰、培養簡單、成本低廉等優點,適合快速表達和生產目的蛋白。但是,它不能進行復雜的翻譯后修飾。2.釀酒酵母表達系統:釀酒酵母是一種真核表達系統,具有蛋白質翻譯后加工能力,適合于表達真核的蛋白,且培養和轉化操作簡便,適合大規模工業化生產。3.昆蟲/桿狀病毒表達系統:這種系統可以對真核的蛋白進行翻譯后加工,適合于表達復雜糖蛋白,且具有較高的表達量和純度。4.哺乳動物細胞表達系統:如HEK293細胞,能夠進行與人類相似的翻譯后修飾,適合表達需要復雜糖基化等修飾的蛋白,但成本相對較高。5.枯草桿菌表達系統:枯草桿菌具有蛋白分泌能力強、培養簡單等優點,適合于工業規模生產。6.粟酒裂殖酵母:其生理特性接近高等生物,適合表達真核膜蛋白。每種表達系統都有其獨特的優勢和局限性,選擇時需要考慮目標蛋白的特性、所需的翻譯后修飾、成本、產量以及純化路線等因素。通過優化表達載體設計、position:absolute;left:269px;top:94px;">GoldenView II吖啶橙核酸染料是一種新型花青類核酸染料,有效替代傳統的溴化乙錠,廣應用于核酸檢測和染色。江蘇重組蛋白表達服務技術服務
漢遜酵母表達系統是一種新型的酵母菌表達平臺,它具有高密度培養和高效表達外源蛋白的能力。在臨床前研究中,漢遜酵母被用于表達瘤病毒(HPV)病毒樣顆粒(VLPs),這為開發HPV疫苗提供了一種有希望的策略。HPVB19是一種高度傳染性的病毒,對免疫功能低下者和胎兒可能造成嚴重后果。目前,尚無針對HPVB19的批準疫苗或抗病毒藥物,因此開發有效的疫苗顯得尤為重要。漢遜酵母表達的VLPs,特別是VP1與VP2共組裝的VLP(VP1/VP2VLP),可能成為HPVB19疫苗開發的候選免疫原。在一項研究中,漢遜酵母成功表達了HPV68bL1蛋白,并形成了VLPs。這些VLPs在小鼠模型中顯示出良好的免疫原性,能夠誘導產生較高滴度的中和抗體,并且對HPV68a型也表現出一定的交叉保護作用。這表明漢遜酵母表達的HPV68bVLPs可能作為多價HPV疫苗的組分,用于疫苗生產。漢遜酵母表達系統還提供了一整套從表達載體構建到產業化發酵和蛋白純化的通用技術平臺,適合不同規模的企業使用。在HPV68bL1蛋白的VLPs研究中,通過高密度發酵和系列純化步驟,獲得了純度超過95%的VLPs,這些VLPs在形態上與天然病毒顆粒相似,并通過假病毒體外中和試驗證明了其免疫學效果。安徽抗體表達服務技術服務研發dNTP Mix(25 mM each)經過嚴格的質量控制,具有出色的穩定性。在 -20℃下保存時,其活性可長期保持穩定。
畢赤酵母表達系統的密碼子優化是提高外源蛋白表達效率的重要策略之一。密碼子優化主要涉及以下幾個方面:1.密碼子使用偏好:通過檢查畢赤酵母基因組的密碼子偏好譜,可以確定密碼子翻譯效率和使用頻率之間的直接相關性。2.密碼子優化策略:對目的基因進行密碼子優化,以適應畢赤酵母的密碼子使用偏好。這通常包括將基因中的密碼子修改為畢赤酵母偏好的密碼子,從而提高mRNA的翻譯效率。3.GC含量調整:密碼子優化過程中,需要考慮外源基因的GC含量,以避免由于GC含量過高或過低導致的mRNA結構不穩定或轉錄提前終止的問題。4.避免稀有密碼子:去除或替換那些在畢赤酵母中使用頻率較低的稀有密碼子,以減少翻譯過程中可能出現的障礙。5.提高表達水平:通過密碼子優化,可以顯著提高外源蛋白在畢赤酵母中的表達水平,有時甚至可以提高數倍到數十倍。6.基因工程應用:在實際應用中,例如人溶菌酶基因的密碼子優化,通過使用畢赤酵母偏好的密碼子替換原有密碼子,成功提高了基因在畢赤酵母中的轉錄表達水平。
微生物基因編輯技術在臨床前研究中的應用是一個快速發展的領域,它涉及到使用CRISPR/Cas9等基因編輯工具對微生物進行精確的基因修飾,以研究其在疾病發生、藥物作用機制等方面的影響,或構建具有特定功能的微生物細胞工廠。1.基因功能研究:通過敲除或敲入特定基因,研究其在微生物中的功能,為理解微生物的生理和病理過程提供信息。2.微生物合成生物學:利用基因編輯技術改造微生物,使其能夠生產藥物、生物燃料或其他高附加值化合物。例如,通過代謝工程提高微生物合成目標產物的效率。3.疾病模型構建:在動物模型中,使用基因編輯技術模擬人類疾病,如:遺傳性疾病等,以研究疾病機理和測試治療方法。4.微生物設計:基因編輯技術可以用于工業微生物的改造,優化微生物的代謝途徑,以提高特定化合物的生產效率。5.核酸檢測:CRISPR系統用于開發分子診斷工具,實現對病原體如病毒、細菌的快速、靈敏檢測。6.微生物群-宿主相互作用:基因編輯技術有助于解析腸道微生物基因對宿主生理學的影響,例如通過敲除腸道微生物中的特定基因,研究其在調節結腸炎癥中的作用。position:absolute;left:414px;top:209px;">Pfu Master Mix (2x)(With Dye)在定量PCR中的兼容性 預混染料可直接用于實時熒光定量PCR,無需額外添加染料。
這項技術服務在多個領域展現出了巨大的應用潛力。在疫苗研發領域,VLP作為一種新型的疫苗候選物,具有良好的免疫原性,能夠誘導機體產生強烈的免疫反應。江畢赤酵母表達的VLP疫苗可以針對多種病毒性疾病,為預防和控制傳染病提供了創新的解決方案。例如,在應對一些新興病毒威脅時,VLP疫苗能夠快速啟動研發和生產,為公眾健康提供及時的保護。此外,在生物醫學研究中,VLP還可以作為藥物載體或診斷試劑的重要組成部分,用于疾病的和檢測。DL50是一種預制的DNA梯,主要用于瓊脂糖凝膠電泳中分析DNA片段的大小。河北漢遜酵母表達HPV VLP技術服務臨床前研究
在保存方面,DNA Marker I可在室溫下穩定保存3個月,長期保存建議置于-20℃。江蘇重組蛋白表達服務技術服務
50×TAE是一種高濃度的緩沖液,主要成分包括Tris(三羥甲基氨基甲烷)、醋酸鈉和EDTA(乙二胺四乙酸)。它是一種常用的電泳緩沖液,廣應用于瓊脂糖凝膠電泳中,用于分離和分析DNA片段。50×TAE的優勢高效分離:TAE緩沖液在低濃度下具有較低的離子強度,適合分離大分子量的DNA片段。它能夠提供穩定的pH環境,確保DNA在電泳過程中保持完整的結構。兼容性強:50×TAE適用于多種類型的瓊脂糖凝膠電泳,無論是低濃度還是高濃度的凝膠,都能提供良好的分離效果。此外,它還兼容多種核酸染料,如EB、GoldView等。經濟實用:50×TAE的高濃度設計(50倍濃縮)使其在使用時只需稀釋至工作濃度(1×TAE),減少了儲存空間和使用成本。使用方法使用50×TAE時,通常需要將其稀釋至1×工作濃度。具體操作如下:取適量50×TAE液體。按照1:49的比例加入去離子水,使其稀釋至1×TAE。配制好的1×TAE可用于制備瓊脂糖凝膠或作為電泳槽的緩沖液。在電泳過程中,1×TAE能夠提供穩定的電流和電壓條件,確保DNA片段在凝膠中均勻遷移。此外,TAE緩沖液在電泳結束后也便于后續的DNA回收和純化操作。保存與注意事項50×TAE液體應保存在室溫或4℃條件下,避免長時間暴露在高溫或強光下。江蘇重組蛋白表達服務技術服務