四川哥廷根小型豬原代肝細胞種類

細胞培養方法：1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。 上海中喬新舟 原代肝細胞服務質量。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！四川哥廷根小型豬原代肝細胞種類

    細胞傳代常用的儀器和試劑傳代細胞時，使用無菌技術和合適的試劑及設備尤為重要。針對您的細胞系選擇合適的培養液來得到比較好的生長和擴增很關鍵。每一個細胞系都有特定的生長營養組分配方，但是大多數細胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細胞生長提供重要的生長因子。，如青霉素和鏈霉素用于防止細胞污染。其他的生長因子，如成纖維細胞生長因子，有助于延長細胞系的生長和擴增。不使用時，要將這些添加物或者“完全”細胞培養液保存于4攝氏度。首先要注意細胞培養液的顏色，富含營養的新鮮培養液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培養液中的營養成分時，開始在培養物中積累廢物和酸性物質，降低pH值。因此，許多細胞培養液含有酚紅，當培養物呈酸性時會將培養液顏色由橙色變為黃色。培養液需在變黃之前更換。當酚紅變為粉紅色時，說明培養基pH偏堿，不利于細胞健康生長。這時可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養液。 四川哥廷根小型豬原代肝細胞種類原代肝細胞廠家直供優勢。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！

傳代培養：1.倒置顯微鏡下觀察細胞形態，確定細胞是否需要傳代。2.培養液瓶打開后，過酒精燈火焰，置酒精燈火焰周圍。3.拿出直頭滴管，套上橡皮吸頭，過火，放入培養液瓶中。4.打開培養瓶，瓶口過火，將培養瓶內的培養液輕輕倒入廢液缸，用2-3mLPBS洗去殘留的舊培養基。5.培養瓶加入，用量以薄薄蓋滿一層為宜，37℃消化，倒置顯微鏡下觀察到細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉，加入少量的含血清的新鮮培養基。6.取彎頭滴管反復吹打細胞使其脫壁并分散，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基，制成細胞懸液，然后分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉，以利于CO2氣體的進入，將培養瓶放回CO2培養箱。7.對半貼壁培養細胞，不需胰酶，直接吹打，加入新鮮培養基，然后分裝到各瓶中。

隨著各型肝炎、肝硬化、肝等慢性肝病的發病率日益升高，體外培養的肝細胞也被普遍地用千肝病基礎研究中。盡管細胞培養技術不斷改進和成熟，國內外也先后建立了多株人肝細胞系，但體外分離和培養人正常肝細胞仍是非常有價值的研究材料。一材料與設備1.設備與器材超凈工作臺、離心機、CO2培養箱、－70℃冰箱、－20℃冰箱。2.無菌材料大培養皿、青霉素小瓶、50ml離心管、刻度吸管、彎頭吸管、T25培養瓶、手術剪、刀、鏤、細胞篩（100目）、消毒用乙醇棉球、流產胚胎、高糖DMEM培養液、胎牛血清、青／鏈霉素、D-Hanks溶液、0.25％胰蛋白酶/0.03%EDTA消化液。原代肝細胞哪個性價比高？上海中喬新舟告訴您。

    目前，NAFLD動物模型和細胞模型仍然是研究NAFLD發病機制及藥物防治的重要手段。動物模型雖然能很好地模擬體內環境，但是存在造模周期長、個體差異大、實驗結果難以控制等問題，而細胞模型個體差異小、影響因素較少、實驗條件可控性強[8-11]。鑒于細胞模型能較好地克服動物模型的不利因素，因此，建立NAFLD體外細胞模型對于研究其發病機制，為進一步防治NAFLD具有重要的理論意義與普遍的實用價值。肝脂肪變性細胞模型是公認的研究NAFLD有效的細胞模型，目前多采用肝細胞株HepG2，通過給予不同比例與濃度的游離脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，誘導造模[12-13]，但因HepG2細胞株來源于腫瘤細胞，與正常生理條件下的肝細胞仍存在著差異[14]。因此采用健康C57BL/6J小鼠的原代肝細胞建立脂肪變性細胞模型，旨在建立一種更接近于臨床的肝細胞脂肪變性模型，為NAFLD的研究奠定基礎。 原代肝細胞的應用范圍十分廣闊。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！四川哥廷根小型豬原代肝細胞種類

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    在原代肝細胞分離培養過程中有以下幾個關鍵操作要點：(1)灌流的溫度。實驗開始前需預熱PBS緩沖液(含EDTA)及IV型膠原酶，使其溫度保持在37℃，灌流開始時從水浴鍋中取出。(2)灌流的方向。由于小鼠門靜脈較細，插管操作較困難，因此采用逆向灌流法，即在較粗的下腔靜脈插管，剪斷門靜脈，使灌流液與血液呈逆向灌流，提高了灌流的成功率及細胞獲取率[17]。(3)灌流的速度。灌流過程應保持勻速、低速，灌流全程時間比較好控制在15min以內。先灌流無鈣無鎂的PBS緩沖液(含EDTA)，灌流速度應保持在7～8mL/min。再灌流IV型膠原酶進行原位消化，灌注膠原酶時，采用間斷法，即用鑷子夾閉門靜脈，快速灌注酶至肝臟略膨起后，停頓30s，待液體排出肝臟回縮后，再次進行推注，反復多次，灌注時間約為5min。(4)膠原酶的濃度。IV型膠原酶濃度為，采用間斷法灌流進行原位消化時，每只小鼠肝臟只需10mL的IV型膠原酶，既提高了灌流效率又可避免膠原酶的浪費。(5)鼠尾膠原蛋白I型的濃度。對于原代肝細胞體外難以培養的問題，不同實驗室建立了多種培養方法來維持其生物學活性，大多采用雙層膠原夾層培養法(膠原三明治培養法)[15]，本實驗采用單層膠原培養法，六孔板中預鋪鼠尾膠原蛋白I型的濃度為。 四川哥廷根小型豬原代肝細胞種類

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