小鼠原代肝細胞的形態學觀察本實驗在Seglen兩步灌流法的基礎上改進,平均每只小鼠肝臟可獲得3×107~5×107個細胞。臺盼藍染色結果顯示,即時分離的原代肝細胞活率可達到85%~90%。即時分離的原代肝細胞胞體呈圓形或類圓形,多為單核或雙核,細胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細胞4h開始貼壁,24h大部分肝細胞貼壁,細胞形態多呈多角形或不規則形,細胞核大而圓,可見明顯的雙核或多核,細胞有向外延展趨勢,細胞間邊界不清(圖1B)。此外,按上述方法分離出的原代肝細胞在體外可存活1周左右,其中3~5d狀態比較好,第6天開始細胞凋亡增加 原代肝細胞的應用范圍十分廣闊。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!內蒙古兔肝細胞(家兔)原代肝細胞哪里有
實驗步驟1麻醉小鼠,酒精消毒,暴露腹腔,帶線縫合針從下腔靜脈下穿過,打一松松的假結,從假結下方的靜脈插入靜脈留置針,將假結系緊。注意:穿帶線縫合針時不要扎破血管,打的結不要包進太多肉,否則結系不緊。靜脈留置針如成功扎進血管,里面的針時會出現回血現象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注),準備給予灌流液1,同時剪開肝門靜脈,灌注時間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min(灌注時間很重要,兩次灌注時嚴格保持針不要動,否則容易扎破血管)。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中,將肝臟轉移至細胞間內,放于400目篩網上,用4度預冷的1640無血清培養液反復吹打肝臟,并用滅菌的鑷子摔打(不要太用力),將肝細胞吹打下來,直至剩下肝包膜(注意肝臟不能摩擦篩網)。取20μl細胞液觀察細胞活力。加入2μl臺盼藍染色()染色涂片,混勻蓋上玻璃片,顯微鏡下觀察。5靜置5min將細胞沉淀(將皿傾斜放置),用小心吸棄部分上清。6將沉淀的肝細胞轉移到50ml離心管中,補齊無血清預冷1640至25ml。4度50g離心2分鐘,一共離心三次,離心后棄上清。7用6ml含10%血清的1640培養液重懸細胞,鋪細胞于培養皿中,因細胞沉降快,每次鋪前都要吹打混勻。 內蒙古兔肝細胞(家兔)原代肝細胞哪里有上海中喬新舟 原代肝細胞品質保障。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
Autotaxin(ATX)是一種分泌型溶血磷脂酶D,可催化溶血磷脂酰膽堿(LPC)水解為溶血磷脂酸(LPA),這是一種多效性生長因子樣磷脂。LPA通過其G蛋白偶聯受體(GPCRs;LPAR1-6)在幾乎所有細胞類型中具有多種作用,表現出重疊的特異性和普遍分布。目前,在各種慢性炎癥性疾病和不同類型的病癥中已檢測到上調的ATX表達。ATX被證明在肺纖維化的發展中起決定性作用;然而,對其在其他纖維增生性疾病中的作用和作用方式知之甚少。擴展和補充先前的研究,我們已經顯示不同病因的CLD中血清ATX水平升高,這與CLD和HCC患者的存活率降低以及肝臟ATXmRNA表達增加相關。因此,在實驗性中毒性肝炎和HCC的動物模型中顯示肝細胞ATX和肝LPA水平升高。體內遺傳和藥理學干預以及離體研究表明,ATX會擾亂脂質穩態并促進纖維化和病癥的發展。
如何傳代細胞首先,重要的是要清楚細胞需要監測的頻繁程度,這取決于該細胞的擴增速度。現在培養液為亮橙色,再觀察其它生長情況。如培養液是否渾濁-如渾濁則可能有污染,細胞的大小和密度以及細胞的總體質量。如果細胞密度達到90%,吸去細胞培養液,用無鈣離子和鎂離子的磷酸緩沖液洗滌。然后加入胰酶,置于37攝氏度約5分鐘,確認細胞脫壁后,加入新鮮細胞培養液終止胰酶的水解。將懸浮的細胞轉移到錐形管離心。細胞離心下來后,小心棄去上清,重懸細胞于新鮮培養液。計數收集到的細胞然后根據合適密度接種細胞立即進行擴增或用于將來擴增。 原代肝細胞哪個性價比高?上海中喬新舟告訴您。
細胞培養是生物學和醫學研究常用的手段之一,可分為原代培養和傳代培養兩種。原代培養是直接從生物體獲取組織或的一部分進行培養,也稱初代培養。嚴格地說即從體內取出組織接種培養到次傳代階段,但實際上,通常把代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。一般持續1-4周。此期細胞呈活躍的移動,可見細胞分裂,但不旺盛。原代培養細胞與體內原組織在形態結構和功能活動上相似性大。由于培養的細胞剛剛從組織分離出來,故更接近于生物體內的生活狀態。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。同時也為以后傳代培養創造條件。原代培養的過程指動物的組織或從機體取出后,經機械法或各種酶類(常用胰蛋白酶)和鰲合劑(常用EDTA)處理,使之分散成單個細胞,加入適量培養基,置于合適的培養容器中,在無菌、適當溫度和一定條件下,使之生存、生長和繁殖的過程。 上海中喬新舟 原代肝細胞值得推薦。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!內蒙古兔肝細胞(家兔)原代肝細胞哪里有
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小鼠原代肝細胞的分離與培養詳細操作步驟,工作液配制:::10%水合氯醛,三蒸水5ml(4℃保存,)(1L):16401袋,,NaHCO32g,酸鈉,加青霉素、鏈霉素,3nMinsulin15μl(),1nM1μl(1mM)1000ml水。調節PH值至,過濾除菌。(也可以用DMEM含酸鈉培養基)μg/ml膠原溶液:1μl純乙酸+μl水=(200μl乙酸+),過濾除菌。在()。7.肝素2mg/ml:肝素鈉20mg,水10ml。8.灌流夜1:50ml/次:Kreb液50ml,50mMEGTA液。9.灌流夜2:30ml/次:Kreb液30ml,μl,膠原酶I15mg(現用現加)。 內蒙古兔肝細胞(家兔)原代肝細胞哪里有
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