簡(jiǎn)單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個(gè)主要步驟:需要選擇培養(yǎng)基配方,同一種培養(yǎng)基,其表達(dá)方式往往存在著差異。所以,除了應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)方法的規(guī)定編制之外,我們一般應(yīng)盡可能收集有關(guān)數(shù)據(jù),加以比較和核對(duì),然后根據(jù)自己的目的選擇和記錄數(shù)據(jù)來(lái)源。需記錄培養(yǎng)基的制備,培養(yǎng)基的制備記錄包括培養(yǎng)基的名稱(chēng)、配方及其來(lái)源、pH值、滅菌溫度、時(shí)間、配制日期、制備人等,并且要復(fù)印記錄和保存原始記錄備查。對(duì)副本的記錄應(yīng)該和培養(yǎng)基一起保存,以防出現(xiàn)混亂。需稱(chēng)重培養(yǎng)基的成分,培養(yǎng)基成分要準(zhǔn)確稱(chēng)量,并注意防止混淆。每一種成分稱(chēng)量完畢后,都要在分裝的一面打上記號(hào),然后將分裝的藥物一起放在左邊。每一個(gè)成分稱(chēng)量完之后,都會(huì)向右移動(dòng)。全部稱(chēng)量完畢,應(yīng)再次檢查。培養(yǎng)基制備器負(fù)載的壓力,有效地避免了培養(yǎng)基過(guò)溫失效和培養(yǎng)基中氣泡的產(chǎn)生。上海大容量 培養(yǎng)基制備器
⑴倒置的小管充滿(mǎn)培養(yǎng)基,不留氣泡。⑵在關(guān)閉殺菌鍋的排氣閥之前,將鍋內(nèi)的氣體排空。⑶試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時(shí),請(qǐng)勿使用橡膠塞。⑷不可過(guò)早打開(kāi)殺菌鍋,等殺菌鍋內(nèi)的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時(shí)再打開(kāi)殺菌鍋。如果按照以上方法操作還有氣泡,可以用水作為培養(yǎng)基組的對(duì)照試驗(yàn)。如果培養(yǎng)基組有氣泡,對(duì)照組沒(méi)有氣泡,可以確定培養(yǎng)基本身原因。為有效體現(xiàn)培養(yǎng)基其生物學(xué)特性,其制備生長(zhǎng)及繁殖需要特定的PH范圍。海南全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器理想設(shè)備應(yīng)在20~30分鐘內(nèi)將培養(yǎng)基從121°C冷卻至50°C以下(視體積而定)。
制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn):a.液體培養(yǎng)基所配制的培養(yǎng)基是液態(tài)的,其中的成分基本上溶于水,沒(méi)有明顯的固形物,液體培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分分布均勻,易于控制微生物的生長(zhǎng)代謝狀態(tài)。b.固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。常用作凝固劑的物質(zhì)有瓊脂、明膠、硅膠等,以瓊脂為常用。固體培養(yǎng)基在實(shí)際中用得十分普遍。在實(shí)驗(yàn)室中,它被用作微生物的分離、鑒定、檢驗(yàn)雜菌、計(jì)數(shù)、保藏、生物測(cè)定等。c.半固體培養(yǎng)基如果把少量的凝固劑加入到液體培養(yǎng)基中,就制成了半固體培養(yǎng)基。以瓊脂為例,它的用量在0.2~1%之間。這種培養(yǎng)基有時(shí)可用來(lái)觀(guān)察微生物的動(dòng)力,有時(shí)用來(lái)保藏菌種。
牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基(又稱(chēng)營(yíng)養(yǎng)肉湯,用于培養(yǎng)細(xì)菌):成分:牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl5g,蒸餾水(或去離子水)1000mL,pH7.4士0.2。制法:將各成分溶解于水中,于20~25℃條件下以1mol/LNaOH溶液用pH計(jì)校正pH7.4,分裝三角瓶(裝量以三角瓶容積的1/2~2/3為宜),或試管(分裝量以試管高度的1/4左右為宜),0.1MPa滅菌15~20min后備用。化學(xué)分類(lèi):天然培養(yǎng)基指一類(lèi)利用動(dòng)、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基等。組合培養(yǎng)基又稱(chēng)為合成培養(yǎng)基或綜合培養(yǎng)基,是一類(lèi)按微生物的營(yíng)養(yǎng)要求精確設(shè)計(jì)后用多種高純化學(xué)試劑配制成的培養(yǎng)基。如葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基等。半組合培養(yǎng)基指一類(lèi)主要以化學(xué)試劑配制,同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基制備器鋁制表面光滑平坦;易于清潔,無(wú)孔隙和裂縫,以防培養(yǎng)基流進(jìn)去。
制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基:(1)方法步驟:計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟:①將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上,右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶,將瓶口迅速通過(guò)火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。④等待平板冷卻凝固,大約需5~10min。然后,將平板倒過(guò)來(lái)放置,使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50℃左右時(shí),才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度?提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。在選購(gòu)培養(yǎng)基制備器時(shí),快速加熱和冷卻能力是重要考量因素,直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量、實(shí)驗(yàn)效率及操作便利性。海南全自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽.上海大容量 培養(yǎng)基制備器
濕熱滅菌:濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行,高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過(guò)1000mL,否則滅菌時(shí)可能會(huì)造成過(guò)度加熱。所有的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或使用說(shuō)明的規(guī)定進(jìn)行。滅菌效果的控制是關(guān)鍵問(wèn)題。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過(guò)度。這對(duì)于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。過(guò)濾除菌:過(guò)濾除菌可在真空或加壓的條件下進(jìn)行。使用孔徑為0.2μm的無(wú)菌設(shè)備和濾膜。消毒過(guò)濾設(shè)備的各個(gè)部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)(如物品),為了達(dá)到有效過(guò)濾,應(yīng)事先將濾膜用無(wú)菌水潤(rùn)濕。上海大容量 培養(yǎng)基制備器