細胞凍存:取出凍存管,注明細胞名稱,代數,日期。離心后,以無菌吸管吸棄上清,不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,根據計數結果,將細胞總數調節成細胞數量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴密封口后,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低1℃。或者,將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置,可以先將凍存管置于4℃30min,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,再轉移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經冷凍的細胞轉移到液氮容器中,置于液氮上方的氣相空間中儲存無血清細胞凍存液,通用于人和各種動物細胞株。杭州珠海無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液對比含血清細胞凍存液的優勢:傳統的細胞凍存液是使用培養基、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,統稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量的死亡。)天津正規無血清細胞凍存液產品介紹無血清細胞凍存液產品性能:胎牛血清取自牛,因此,難以應用到需要避免接觸動物源的應用領域。
無血清細胞凍存:在細胞培養中,細胞凍存是較關鍵環節之一,尤其在細胞治好、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求,下面就根據降溫速度以及凍存液組分對細胞凍存做詳細介紹。根據降溫速度區分,細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。根據凍存方式不同可以分為慢速凍存(程序降溫法)與快速凍存(非程序降溫法)。程序降溫凍存技術要點是慢凍,標準的凍存程序為降溫速率-1~-2/℃min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min。之前,常用的傳統方法是將凍存管置于4℃30分鐘--20℃60分鐘--80℃過夜-液氮罐。不過,由于步驟較多,間隔時間又長,很容易遺忘。之后,人們也開始使用程序降溫盒。將凍存管放入程序降溫盒中,再將程序降溫盒放入-80℃冰箱。以1℃/min的速度進行降溫。
無血清細胞凍存液產品用途:1.無血清細胞凍存液可用于造血干細胞、間充質干細胞等干細胞的儲存。2.無血清細胞凍存液可用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。3.無血清細胞凍存液可用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。無血清細胞凍存液產品原理:無血清細胞凍存液,含多種保護劑成分。一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量,無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,在細胞內外進行雙重保護,較大提高了細胞復蘇存活率。無血清凍存液使用方法:將凍存管直接轉移至-80C水箱中冷凍保存。
無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項:無血清細胞凍存液:含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量,我公司無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,在細胞內外進行雙重保護,較大提高了細胞復蘇存活率。【產品用途】1.用于免疫細胞及干細胞的存儲。2.細胞保藏中心,用于細胞株的長期保存。3.科研高校,細胞株凍存。4.醫院樣本庫細胞樣本保存。【使用方法】1、細胞凍存前準備(1)要求凍存的細胞在對數生長期,且活率大于90%。(2)計算細胞密度,一般要求密度在1-3x10cells/mL,不同細胞系請參照附表。2、細胞凍存過程(1)將要凍存的細胞懸液,進行細胞計數,計數后離心,8003min即可。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中,根據密度調整細胞凍存液用量。(3)反復吹吸混勻后,分裝于細胞凍存管中,每管500ul-1000ul,(建議500ul/管)。無血清細胞凍存液產品特色:即用型,無需現配,即開即用。杭州珠海無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液的優勢:因不含血清,批次間差異小。杭州珠海無血清細胞凍存液
細胞凍存的注意事項:1.為保持細胞較大存活率,一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為-1℃~12℃/分鐘,當溫度下降達-25℃時,下降速度可增至-5~-10℃/分鐘,到-100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促冰晶形成。3.初次凍存者在下降凍存時,宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置,然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系,當已掌握以上各參數和凍存技術熟練后,光按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果。杭州珠海無血清細胞凍存液