細胞凍存:取出凍存管,注明細胞名稱,代數(shù),日期。離心后,以無菌吸管吸棄上清,不要吸到底部的細胞沉淀。將細胞沉淀與凍存液充分混勻,根據(jù)計數(shù)結(jié)果,將細胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細胞凍存懸液分裝進細胞凍存管中,一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴(yán)密封口后,使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低1℃。或者,將裝有細胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中,然后將凍存盒置于–80℃條件下過夜。若無凍存盒及其他凍存裝置,可以先將凍存管置于4℃30min,再-20℃凍存1h直至完全冷凍,再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中,置于液氮上方的氣相空間中儲存。無血清細胞凍存液產(chǎn)品特色:各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。杭州正規(guī)無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹
細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是“慢凍快融”,這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多用二甲基亞砜(DMSO)作為保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性;緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少冰晶對細胞的物理損傷。復(fù)蘇細胞采用快速融化的方法可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。血清完全細胞凍存液,通用于各種動物細胞株。特別配方有效提高細胞存活率和活力。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染,確保凍存細胞安全。適合用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。杭州正規(guī)無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹無血清細胞凍存液使用方法:直接將含細胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱,長期冷凍保存。
無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項:無血清細胞凍存液:含多種保護劑成分,一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽離子進入細胞的數(shù)量,我公司無血清細胞凍存液,為多種保護劑組合,在細胞內(nèi)外進行雙重保護,較大提高了細胞復(fù)蘇存活率。【產(chǎn)品用途】1.用于免疫細胞及干細胞的存儲。2.細胞保藏中心,用于細胞株的長期保存。3.科研高校,細胞株凍存。4.醫(yī)院樣本庫細胞樣本保存。【使用方法】1、細胞凍存前準(zhǔn)備(1)要求凍存的細胞在對數(shù)生長期,且活率大于90%。(2)計算細胞密度,一般要求密度在1-3x10cells/mL,不同細胞系請參照附表。2、細胞凍存過程(1)將要凍存的細胞懸液,進行細胞計數(shù),計數(shù)后離心,8003min即可。度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中,根據(jù)密度調(diào)整細胞凍存液用量。(3)反復(fù)吹吸混勻后,分裝于細胞凍存管中,每管500ul-1000ul,(建議500ul/管)。
無血清快速細胞凍存液,通用于各種動物細胞株。特別配方具有有效提高細胞凍存活率和復(fù)蘇活力。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全。既適用于一般培養(yǎng)細胞的凍存,也適用于無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞的凍存。產(chǎn)品特色:1.高安全性,完全使用醫(yī)藥品等級原料進行生產(chǎn),不含動物成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低,各批產(chǎn)品之間有更高的產(chǎn)品質(zhì)量一致性。2.細胞存活率高,無批次差異。3.完全凍存液配方,可直接使用,方便簡捷,可直接存放于-80℃冰箱凍存,無需經(jīng)過費時的程序降溫過程(省時、省力、省錢)。在細胞內(nèi)外進行雙重保護,較大提高了細胞復(fù)蘇存活率。
細胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外,減少細胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。無血清細胞凍存液:一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優(yōu)先結(jié)合細胞外的水分子。廈門北京無血清細胞凍存液
隨著細胞治好以及細胞儲存產(chǎn)業(yè)發(fā)展,細胞凍存也面臨從科研應(yīng)用走向產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化。杭州正規(guī)無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹
無血清細胞凍存液:采用patent的凍存配方,用包括重組人血白蛋白等多種蛋白組分替代了血清的用途。用包括DMSO在內(nèi)的復(fù)合凍存保護劑替代了單一的DMSO的保護作用。復(fù)合保護劑的內(nèi)部保護劑,易于穿透細胞膜,避免在細胞凍存過程中細胞內(nèi)部的水分子形成冰晶損傷細胞;外部保護劑,可在溶液形成冰晶之前,在細胞膜外部競爭性的結(jié)合細胞膜表面的水分子,從而降低細胞外溶液的電解質(zhì)濃度,減少陽離子進入細胞的數(shù)量。在細胞內(nèi)部與外部的協(xié)同保護作用下,明顯降低了溫度迅速下降與溫度上升對細胞的損害,因此大幅度提高了細胞經(jīng)過凍存后的復(fù)蘇存活率。杭州正規(guī)無血清細胞凍存液產(chǎn)品介紹