實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：Ct...

用于體外細胞培養的胎牛血清及其制備方法：包括以下步驟：采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿，具體步驟如下：采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進行混合，將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內充分滋潤容器內壁；將胎牛血...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定量分析可以分為定量和相對定量兩種。定量指的是我們想知道某個基因在初始樣品中具體的拷貝數或濃度是多少？定量實驗必須使用已知拷貝數的標準品，必須做標準曲線。而相對定量是指我們想知道某一個基因在不同樣...

胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現有許多種原因，但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。所有胎牛...

胎牛血清中沉淀物該如何處理?胎牛血清中沉淀物的出現有許多種原因，但較普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成，而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后，也會存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物，并不影響血清本身的質量。所有胎牛...

胎牛血清：胎牛血清初次解凍后，應按單次習慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清，應在一周內用完。為保證細胞培養的較佳效果，血清和培養基的配置，應遵循“現用現配”原則。配好的培養液，應于一周內用完。血清避免反復凍融，避免在4°C或更高溫度儲...

Real-time PCR原理：基于探針的化學法，Real-time PCR應用一個或多個熒光標記的寡核苷酸探針檢測PCR擴增產物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測特異性擴增產物，單單檢測特異性擴增產物，DNA及RNA定量；基因表達驗證；等位基因鑒別；SN...

Real-time PCR反應：多重連接依賴探針擴增（MLPA):允許用單個引物對擴增多個靶標，從而避免多重PCR的分辨率限制。多重聚合酶鏈反應:由單個PCR混合物中的多個引物組組成，以產生對不同DNA序列特異的不同大小的擴增子。通過同時靶向多個基因，可以從單...

胎牛血清FBS的處理方法？胎牛血清FBS一般需要冷凍保存，在-5到-20°C之間，并且可以在2到8°C的溫度下解凍。將血清等分并冷凍在較小的部分（通常為50ml試管）中通常很有用，以避免多次冷凍和解凍循環。有時，一些FBS等分試樣在冷凍溫度下仍保留在液體中。這...

Real-time PCR原理：所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。DNA結合染料法，應用一種帶有熒光的、非特異的DNA結合染料檢測PCR過程中積累的...

選購FBS應考慮哪些標準？產品檢測，每款FBS在生產上市之前，必須經過嚴格的質控檢測。質控環節必不可少，以確保上市的血清符合規定合乎規格，而血清產品分析證書（COA）就是FBS質控的重要體現。在COA中，常規的檢測指標包括內的毒性、總蛋白、細菌、病毒等，另外總...

Real-time PCR：對擴增技術的修飾可以從完全未知的基因組中提取片段，或者可以產生感興趣區域的單鏈。聚合酶鏈反應有許多應用于傳統的DNA克隆。它可以從更大的基因組中提取片段以插入載體，這可能只有少量可用。使用一組“載體引物”，它還可以分析或提取已經插入...

胎牛血清(FBS)是來自胎牛的凝結血液的液體部分，不含細胞、纖維蛋白和凝血因子，但含有大量對細胞生長至關重要的營養和大分子因子。牛血清白蛋白是FBS的主要成分。FBS中的生長因子對于培養細胞的維持和生長至關重要。FBS還含有多種小分子，如氨基酸、糖、脂質和Ho...

Real-time PCR雙熒光標記探針設計原則：具體的其他要求可以具體聯系設計公司，拿到合成好的引物，需要先確認引物的性能。可以用這對引物先擴增梯度稀釋后的標準品（標準品介紹見后續內容）。由不同梯度標準品的加量和其對應的Ct值，描繪出一條標準曲線。這里要注意...

胎牛血清是血液凝固后的液體部分，不含血細胞、纖維蛋白及凝集因子等，含有多種對細胞生長必需的營養因子及大分子物質。血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。此外，重要的是，胎牛血清中含有大量對細胞生長必需的生長因子。胎牛血清也含有一些小分子物質，如氨基酸、糖類、脂類及Ho...

胎牛血清融化方法：只要2.5個小時，溫和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子，讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節約了時間，而且較大限度減少了血清沉淀出現的幾率。血清融化過程中，蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白，血...

Real-time PCR相對定量中的標準曲線法如何進行：主要是相對定量標準品的制作，一般有三種方法：1、比較復雜的方法：質粒，采用Biotnt提供內參基因的特異性Real-time PCRmRNA引物，對目的基因進行Real-time PCR實驗，得到PCR...

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實驗證明，經過正確處理的熱滅活胎牛血清，對于大多數的細胞而言都是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至可能因為高溫處理影響了血清的質量，從而造成細胞生長速率的降低。經過熱處理的血清，沉淀物的形成...

胎牛血清的作用：胎牛血清提供對維持細胞指數生長的Hormone，胎牛血清基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。胎牛血清提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，胎牛血清能結合或調變它們所結合的物質活力。有些情況下結合蛋白...

胎牛血清：胎牛血清是通過母牛剖腹產胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血，經自然層析、離心后收集得到去除血細胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體，后經生產使用多級高置流膜過濾技術和三級0.1μm終端微濾方法處理后，常用于細胞培養相關實驗。胎牛血清是細胞培養...

Real-time PCR操作流程：1、收集樣品。2相關試劑總RNA提取試劑TREzolReagent(RNA提取試劑),M-MLV（cDNA逆轉錄酶）,RNA純化試劑,RealqPCRMasterMix（螢光定量PCR預混試劑）。3實驗儀器螢光定量PCR儀;...

胎牛血清的處理方法有：熱滅活，FBS的常見處理方法是熱滅活，其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘，偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補體系統的任何成分，以及其他潛在的未知細胞生長抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染，這不再是一個問題，因為現在所有的血...

聚合酶鏈式反應：因為PCR擴增了目的DNA區域，所以PCR可以用于分析極少量的樣品。這對于法醫檢定法，當時只有微量的DNA可作為證據。聚合酶鏈反應也可用于分析古代DNA那已經有數萬年的歷史了。這些基于聚合酶鏈反應的技術已經成功地應用于動物身上，例如四萬年前猛犸...

胎牛血清：胎牛血清(FBS)，胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質含量...

Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射螢光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何螢光信號，從而保證螢光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。此方法適用于：...

胎牛血清(FBS)是來自胎牛的凝結血液的液體部分，不含細胞、纖維蛋白和凝血因子，但含有大量對細胞生長至關重要的營養和大分子因子。牛血清白蛋白是FBS的主要成分。FBS中的生長因子對于培養細胞的維持和生長至關重要。FBS還含有多種小分子，如氨基酸、糖、脂質和Ho...

胎牛血清：胎牛血清初次解凍后，應按單次習慣用量分裝，分裝后的血清仍-20°C凍存。若置于4°C的血清，應在一周內用完。為保證細胞培養的較佳效果，血清和培養基的配置，應遵循“現用現配”原則。配好的培養液，應于一周內用完。血清避免反復凍融，避免在4°C或更高溫度儲...

如何區別真假胎牛血清：外觀，拿到血清，較先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要，顏色根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，...

如何區別真假胎牛血清：免疫球蛋白，國產血清的只是定性檢測，結果也很不準確，進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數值能完全體現出時的牛齡情況，國產血清，基本都是新生牛的，血清中容易產生IgM，IgG的含量也偏高，進口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。其...

如何區別真假胎牛血清：沉淀，很多血清客戶，會發現進口血清有沉淀，從而懷疑血清的質量問題，這是沒有根據的。血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產生，對血清質量沒有任何影響，沉淀的產生原因很多，和廠家的加工生產方式密切相關。國產的血清，大多來自北方，由于價格低廉，保存環...