膜片鉗使用操作流程及注意事項：1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電，檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求，完成值日等相關工作（值日生按照實驗室統一所發值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉...

全自動膜片鉗系統技術指標：1）操作簡單，全過程可自動化。2）實驗迅速，通量高。一般每天可達到50個實驗數據左右。3）藥液交換迅速。細胞內、外液的交換是在平面芯片上進行，所以藥液交換非常迅速，作用時間快，外灌流時間常數：~200ms內灌流時間常數：~2s。4）藥...

膜片鉗的數據如何處理：穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進...

膜片鉗操作實驗：標本制備根據研究目的的不同，可采用不同的細胞組織，如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等，現在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞，必須滿足實驗要求，一般多采用酶解分離法，也可采用細胞培養法；另外，由于與分子生物學技術的結合，現在也運用分子...

膜片鉗技術操作方法：開始封接:調低微操步進速度，使電極尖銳端慢慢向細胞靠近，如發現基線方波突然變小，封接電阻上升時，即停止電極下降，通過注射器給電極負壓，封接成功的可見方波很快變小，電阻升至G歐。此時，調節快電容補償按鈕，將快電容電流補償掉，如封接穩定后，準備...

膜片鉗技術操作方法：實驗前準備:打開總電源及穩壓電源，打開電腦、放大器，并開啟程序軟件，新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果，打開倒置顯微鏡，監視器和微操備用，取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中，置于倒...

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當的負壓用電極的纖細開口...

活性炭處理胎牛血清的應用：活性炭處理胎牛血清主要用于受體研究和雌Hormone相關的細胞研究實驗。同時活性炭處理胎牛血清極大的降低了多種Hormone和生長因子，減少了影響細胞生化分析的干擾因子。性炭處理胎牛血清減少了血清中的類固醇類化合物，3x100nm無菌...

挑選胎牛血清：Antibiotic含量，Antibiotic的使用情況，也需考慮在內。國內外的血清，都不對Antibiotic進行測試（無四環素胎牛血清之外）。但相較于國內Antibiotic的濫用，在其他國家，Antibiotic使用大多較為嚴格，用量有限，...

引物的設計對于這個實驗至關重要，因為Real-time PCR的檢測靈敏度比較高，所以相應的對引物設計的要求就很高。普通的要求規則大家都知道，還有幾點必須注意：1，引物的錯配率（引物錯配形成引物二聚體，但是SYBR照樣能嵌入進去，結果導致實驗結果的誤差很大，重...

胎牛血清與其它牛血清有何區別？胎牛血清（FoetalBovineSerum，簡稱FBS）：胎牛血清是指懷孕3-8個月的母牛被屠宰后，發育未完全的胎牛心臟密閉穿刺采的血后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發育因子，一旦胚胎發育完全這些因子會自動...

Real-timePCR技術服務聚合酶鏈式反應的試驗污染：實驗室中克隆質粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質粒在單位容積內含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內的質粒，由于活細...

選購FBS應考慮哪些標準？產品檢測，每款FBS在生產上市之前，必須經過嚴格的質控檢測。質控環節必不可少，以確保上市的血清符合規定合乎規格，而血清產品分析證書（COA）就是FBS質控的重要體現。在COA中，常規的檢測指標包括內的毒性、總蛋白、細菌、病毒等，另外總...

Real-time PCR雙熒光標記探針設計原則：具體的其他要求可以具體聯系設計公司，拿到合成好的引物，需要先確認引物的性能。可以用這對引物先擴增梯度稀釋后的標準品（標準品介紹見后續內容）。由不同梯度標準品的加量和其對應的Ct值，描繪出一條標準曲線。這里要注意...

如何區別真假胎牛血清：1、血紅蛋白，標準為不高于20mg/dl，顏色越紅，數值越高，反之，數值越低。2、pH，國產血清，大多高于7.5，進口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關，這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細菌、霉菌、支原體...

實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：Ct...

引物的設計對于這個實驗至關重要，因為Real-time PCR的檢測靈敏度比較高，所以相應的對引物設計的要求就很高。普通的要求規則大家都知道，還有幾點必須注意：1，引物的錯配率（引物錯配形成引物二聚體，但是SYBR照樣能嵌入進去，結果導致實驗結果的誤差很大，重...

所謂real-timeQ-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，之后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定量分析可以分為定量和相對定量兩種。定量指的是我們想知道某個基因在初始樣品中具體的拷貝數或濃度是多少？定量實驗必須使用已知拷貝數的標準品，必須做標準曲線。而相對定量是指我們想知道某一個基因在不同樣...

胎牛血清融化：胎牛血清在融化過程中，瓶子里冰塊的底部你會看見亮亮的蛋白絲在下沉，如同蜂蜜溶于水時的亮線，這就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔點高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高級冰淇淋和大棒冰的區別，你懂得！）試想，如果采用4℃過夜的方法，1...

Real-time PCR鏈反應注意事項：在實驗過程中要防止RNA的降解，保持RNA的完整性。在總RNA的提取過程中，注意避免mRNA的斷裂；為了防止非特異性擴增，必須設陰性對照；內參的設定：主要為了用于靶RNA的定量。常用的內參有G3PD（甘油醛-3-磷酸脫...

胎牛血清在細胞培養中的作用：1.提供對維持細胞指數生長的Hormone，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，能結合或調節它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有...

Real-time PCR：所謂Real-time PCR技術，是指在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號累積實時監測整個PCR進程，之后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。利用螢光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化，通過...

Real-time PCR從用途上分可以分為定性分析和定量分析：定量分析可以分為定量和相對定量兩種。定量指的是我們想知道某個基因在初始樣品中具體的拷貝數或濃度是多少？定量實驗必須使用已知拷貝數的標準品，必須做標準曲線。而相對定量是指我們想知道某一個基因在不同樣...

Real-time PCR原理：基于探針的化學法，Real-time PCR應用一個或多個熒光標記的寡核苷酸探針檢測PCR擴增產物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測特異性擴增產物，單單檢測特異性擴增產物，DNA及RNA定量；基因表達驗證；等位基因鑒別；SN...

胎牛血清的功能：胎牛血清是細胞培養中用量較大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成份，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的Hormone，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能...

實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：Ct...

胎牛血清：胎牛血清是通過母牛剖腹產胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血，經自然層析、離心后收集得到去除血細胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體，后經生產使用多級高置流膜過濾技術和三級0.1μm終端微濾方法處理后，常用于細胞培養相關實驗。胎牛血清是細胞培養...

胎牛血清在細胞培養中的作用：1.提供對維持細胞指數生長的Hormone，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，能結合或調節它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有...

用于體外細胞培養的胎牛血清及其制備方法：包括以下步驟：采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿，具體步驟如下：采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進行混合，將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內充分滋潤容器內壁；將胎牛血...