冷凍電子顯微鏡技術中單顆粒重構技術:該技術也叫做單顆粒分析,主要適用于結構具有全同性的生物大分子的結構解析,蛋白質的分子量通常要求在100KD以上,在顆粒數目足夠多的情況下,理論上其分辨率可以達到原子水平。該方法的圖像處理和三維重構計算過程如下:從原始的電鏡照...
冷凍電鏡技術中的單顆粒分析法(Singleparticleanalysis,SPA):單顆粒技術獲得投影的具體方法:制備很多具有同樣結構的大分子樣品,將其進行分散冷凍后進行隨機的投影拍照,再通過計算模擬測定角度,對具有相同角度的粒子進行組合,突出其中更特殊、更...
冷凍電子顯微技術學解析生物大分子及細胞結構的中心是透射電子顯微鏡成像,包括樣品制備、圖像采集、圖像處理及三維重構等幾個基本步驟。三維重構:數據處理的較終目的是為了獲得生物樣品的三維質量密度圖,由二維圖像推知三維結構的方法即三維重構。其理論原理是在1968年由D...
冷凍電鏡技術基本原理之三維冷凍電鏡技術:樣品經過在液氮中的冷凍固定,使得生物大分子中的H2O分子以玻璃態(tài)的形式存在,保持低溫,將樣品放入顯微鏡,高度相干的電子作為光源從上面照射下來,透過樣品和附近的冰層,受到散射,利用探測器和透鏡系統把散射的信號成像記錄下來,...
冷凍電鏡技術解析結構的一般流程是怎樣的?對樣品的要求是什么?冷凍電鏡解析蛋白結構一般流程為:蛋白表達純化;負染樣品準備:約2小時完成;負染樣品的數據收集:約8小時完成;冷凍樣品的準備:約4小時完成;冷凍樣品的數據收集:48-120小時完成。三維結構重建。冷凍電...
冷凍電鏡技術原理之電子斷層掃描成像技術:通過在顯微鏡內傾轉樣品從而收集樣品多角度的電子顯微圖像并對這些電子顯微圖像根據傾轉幾何關系進行重構的方法稱為電子斷層掃描成像技術。該方法主要應用于細胞及亞細胞器,以及沒有固定結構的生物大分子復合物(分子量范圍為800kD...
胎牛血清制備:離心,將準備好的瓶放入離心套筒調好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接...
胎牛血清:胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等,其組成成份大部分已知,但還有一部分尚不清楚,這些物質對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。其中不含細胞、纖維蛋白和凝血因...
胎牛血清應該如何保存,可以存放多久?胎牛血清可長期儲存于-20℃冰箱中。倘若把胎牛血清存放在4℃冰箱,請不要超過一個月。如果一次性無法用完一瓶血清,建議將胎牛血清無菌條件下分裝并儲存于-20℃,避免反復凍融。如何正確地解凍胎牛血清?采用逐步解凍法,將胎牛血清從...
胎牛血清制備:離心,將準備好的瓶放入離心套筒調好平衡后,對稱放入離心機,按1800轉/分鐘離心50分鐘后,放入4℃冷庫備用。抽血清,取出4℃冷庫離心好的瓶,注意輕抬輕放,以免將下層血塊和血清混層。將經過高壓滅菌裝有兩孔瓶塞的5000ml大瓶的抽氣孔一端的管子接...
活性炭處理胎牛血清的應用:活性炭處理胎牛血清主要用于受體研究和雌Hormone相關的細胞研究實驗。同時活性炭處理胎牛血清極大的降低了多種Hormone和生長因子,減少了影響細胞生化分析的干擾因子。性炭處理胎牛血清減少了血清中的類固醇類化合物,3x100nm無菌...
選購FBS應考慮哪些標準?產品檢測,每款FBS在生產上市之前,必須經過嚴格的質控檢測。質控環(huán)節(jié)必不可少,以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格,而血清產品分析證書(COA)就是FBS質控的重要體現。在COA中,常規(guī)的檢測指標包括內的毒性、總蛋白、細菌、病毒等,另外總...
如何區(qū)別真假胎牛血清:主要技術指標,1、內的毒性,標準為不高于5EU/ml。內的毒性是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內的毒性含量的高低可表現出采的血到生產一系列過程中的無菌操作情況。目前,國產血清基本都能達到這一要求,很多進口胎牛血清內的毒性含量反而更高,只要求...
胎牛血清的生產工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化...
胎牛血清制備:用止血鉗夾住血管,切開1厘米左右的切口進行插管,插好管后打開血管的止血鉗,讓牛血順采的血管流入另一個潔凈房間內的瓶中。采的血瓶采的血前經干烤滅菌(180℃2小時)后,按無菌操作注入10毫升左右經高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口,于采的血前半小時放入3...
胎牛血清:在細胞培養(yǎng)過程,質量粗糙的FBS可能會導致細胞出現生長速度緩慢、不貼壁、容易老化等現象,從而導致實驗受阻。經過質量驗證的FBS,則可以十分確定這款FBS對哪些細胞具有良好的培養(yǎng)效果,進而判斷其能否把自己的細胞養(yǎng)好。對于質量好的FBS,通常采用血清敏感...
胎牛血清FBS的處理方法?胎牛血清FBS一般需要冷凍保存,在-5到-20°C之間,并且可以在2到8°C的溫度下解凍。將血清等分并冷凍在較小的部分(通常為50ml試管)中通常很有用,以避免多次冷凍和解凍循環(huán)。有時,一些FBS等分試樣在冷凍溫度下仍保留在液體中。這...
胎牛血清-血清的主要成分:血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等...
胎牛血清:胎牛血清(FBS),胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質含量...
如果胎牛血清解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,應該如何去除?胎牛血清中的沉淀物出現有很多種原因,但較普遍的原因是由于胎牛血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白在胎牛血清解凍后,也會存在于胎牛血清中,這也是造成沉淀物的主要原因之一。但少量絮狀沉淀物,并不影響胎牛血清本...
如何區(qū)別真假胎牛血清:主要技術指標,1、內的毒性,標準為不高于5EU/ml。內的毒性是細菌破碎后細胞壁的成分,因此內的毒性含量的高低可表現出采的血到生產一系列過程中的無菌操作情況。目前,國產血清基本都能達到這一要求,很多進口胎牛血清內的毒性含量反而更高,只要求...
胎牛血清的功能:胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量較大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的Hormone,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結合蛋白,能...
胎牛血清:解凍胎牛血清時,請按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若...
胎牛血清:解凍胎牛血清時,請按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若...
血清中絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?1.將冷凍保存的血清取出后,置4℃冰箱靜止過夜;2.待血清融化后,上下顛倒,輕輕混勻,繼續(xù)4℃2-3小時;3.輕輕吸取上層血清,分裝,余底下50ml左右;4.低速離心5分鐘,去掉沉淀。若解凍后發(fā)現有絮狀沉淀物出現,該怎么處...
胎牛血清的生產工藝:胎牛血清適合脈沖示蹤實驗(同位素標記研究細胞代謝)適合轉染CHO后的篩選,避免外源小分子對細胞產生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎上進行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經過0.1微米膜三重過濾,要進行一系列的檢測,包括理化性質檢查(如滲透...
胎牛血清的處理方法有:熱滅活,FBS的常見處理方法是熱滅活,其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘,偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補體系統的任何成分,以及其他潛在的未知細胞生長抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染,這不再是一個問題,因為現在所有的血...
用于體外細胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:包括以下步驟:采集懷孕母牛的胎牛血液獲得血漿,具體步驟如下:采用含有體積含量4-6%葡萄糖的注射液、含有質量含量0.2-0.6%檸檬酸鈉的水溶液進行混合,將上述兩者混合后的混合液A置入取血容器內充分滋潤容器內壁;將胎牛血...
胎牛血清:解凍胎牛血清時,請按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若...
胎牛血清的生產工藝:胎牛血清適合脈沖示蹤實驗(同位素標記研究細胞代謝)適合轉染CHO后的篩選,避免外源小分子對細胞產生干擾。透析胎牛血清是在胎牛血清的基礎上進行加工的。胎牛血清在無菌條件下要經過0.1微米膜三重過濾,要進行一系列的檢測,包括理化性質檢查(如滲透...