膜片鉗使用的注意事項：1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放...

實時定量PCR的系統構成及工作原理：熒光定量檢測系統由實時熒光定量PCR儀，實時熒光定量試劑，通用電腦，自動分析軟件等構成。設備由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。...

全自動膜片鉗的優勢：自動化：抓取細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作全部自動化，極大的節約實驗人員的時間精力。簡約化：傳統膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統、微電極拉制儀，防震臺、屏蔽網等全都不需要。效率高：是傳統膜片鉗實驗效率的5-10倍。可靠性：實驗結果輕松...

Real-time PCR實驗注意事項-防止RNA酶污染的措施：1.所有的玻璃器皿均應在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2.塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。3.有機玻璃的電泳槽等，可...

Real-time PCR鏈反應的常見問題分析與解決方法：反應緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。引物量過多。減少反應體系中引物的用量。模板量過多。質粒DNA的用量應

膜片鉗電生理技術服務：膜片鉗技術的建立，對生物學科學特別是神經科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的（或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯系在一起，同時又將神經科學的不同...

Real-time PCR：使用Real-time PCR進行基因檢測,被普遍應用于病毒和病原菌檢測、轉基因食品檢測、遺傳病基因檢測等領域。一般首先需要利用專業使用的試劑盒從待檢樣品中提取其核酸（DNAorRNA），并經過精制等復雜的操作（通常稱為前處理操作）...

所謂real-timeQ-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，之后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

膜片鉗電生理技術服務實驗流程之電機制備和實驗的記錄和分析數據：電極制備：膜片微電極是將玻璃毛細管用電極拉制儀拉制而成的，主要分為以下步驟：拉制：膜片微電極是將玻璃毛細管用拉管儀拉制而成。涂硅酮樹酯：將硅酮樹酯涂于微電極的較尖銳端以外的部分，然后將其通過加熱鎳鉻...

膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用：1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用：利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究，將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況，而且還可以對細胞的電信號傳遞...

膜片鉗技術操作方法：實驗前準備:打開總電源及穩壓電源，打開電腦、放大器，并開啟程序軟件，新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果，打開倒置顯微鏡，監視器和微操備用，取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中，置于倒...

引物的設計注意事項：1，引物設計要跨內含子，不能在一個外顯子上（我們的實驗是以cDNA為模板來擴增的，如果有DNA污染的話，因為DNA上含有分子量很大的內含子，不可能完成擴增。這對我們消除整個實驗的誤差起很大的作用）。2，引物設計的時候要盡可能設計在同一退火溫...

Real-time PCR鏈反應：嵌套聚合酶鏈反應:通過減少DNA非特異性擴增的背景，提高DNA擴增的特異性。兩組引物用于兩個連續的PCR。在個反應中，一對引物用于產生DNA產物，除了預期的靶之外，該產物可能仍然由非特異性擴增的DN段組成。然后用一組引物將產物...

膜片鉗技術之全細胞記錄的優點：與傳統的細胞內記錄相比，全細胞記錄也有很多好處，比如電極尖銳端開口較大，電阻只2~20MΩ，易于進行電壓/電流鉗制，噪聲很大程度下降，電極電壓降也變得很小，補償非常容易。與單通道記錄相比，單通道記錄無法獲得整個細胞的功能變化信息，...

膜片鉗使用的注意事項：1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放...

膜片鉗技術之全細胞記錄的實驗流程：（1）仔細檢查實驗系統各儀器間的線路連接。（2）依次打開各儀器的電源開關和實驗軟件，檢查各參數的初始設置。（3）將樣品置于倒置顯微鏡的載物臺上。（4）電極安裝。（5）偏移電位的補償和電極電阻的測定：在微操縱器控制下使微電極進入...

膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值，以研究動作電位產生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規律，而無法反映單個通道的活動特點，同時通過細胞內...

膜片鉗電生理技術服務只適用于藥物的初篩和二次篩選，且對樣本有很高的選擇性，而傳統的膜片鉗技術可適用于各種樣本，應用范圍廣，能夠分析檢測所有的離子通道類型，同時能夠分析離子通道的動力學特征。因此目前，傳統膜片鉗技術仍然是不可替代的。在進行膜片鉗實驗時，玻璃電極給...

膜片鉗實驗常見問題及解決方法：膜片鉗技術是電生理記錄的常用手段，目前在科學研究中使用越來越普遍。但在具體膜片鉗實驗操作的過程中，總會遇到各種各樣的問題，對實驗人員造成很多困擾。本次講座主要從實驗角度出發，以簡單，實用的原則，著重講解實驗中遇到的各種問題，以及解...

膜片鉗技術本質上也屬于電壓鉗范疇，兩者的區別關鍵在于：①膜電位固定的方法不同；②電位固定的細胞膜面積不同，進而所研究的離子通道數目不同。電壓鉗技術主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數值，以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或...

膜片鉗電生理技術服務記錄的幾種形式：全細胞記錄構型(whole-cell recording)　高阻封接形成后，繼續以負壓抽吸使電極管內細胞膜破裂，電極胞內液直接相通，而與浴槽液絕緣，這種形式稱為“全細胞”記錄。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電...

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當的負壓用電極的纖細開口...

膜片鉗實驗難度大、技術要求高，要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實驗數據中，經過處理和分析，得出有意義、有價值的結果和結論，就顯得不那么容易，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音，避免電極前端的污染，提高封接成功率，具體實驗過程中還需要考...

膜片鉗系統有如下應用局限性(1)光能應用于懸浮細胞的紀錄，因此大部分的紀錄對象為化細胞，而對于需要貼壁生長的大多數正常細胞，現有的自動膜片鉗系統就無法紀錄；(2)在紀錄對象上，目前的膜片鉗系統只能紀錄胞膜形狀平整飽滿的細胞，大部分是工具細胞如化細胞，此類細胞有...

膜片鉗的應用：對單細胞形態與功能關系的研究：將膜片鉗技術與單細胞逆轉錄多聚酶鏈是反應技術結合，在全細胞膜片鉗記錄下，將單細胞內容物或整個細胞（包括細胞膜）吸入電極中，將細胞內存在的各種mRNA全部快速逆轉錄成cDNA，再經常規PCR擴增及待檢的特異mRNA的檢...

膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用：1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用：利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究，將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況，而且還可以對細胞的電信號傳遞...

膜片鉗記錄的幾種形式：細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上，形成高阻封接，在細胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制，高分辨測量膜電流，稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的...

膜片鉗在通道研究中的重要作用：對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究：通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究，了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經細胞損害中作用機制的研究表明，缺血性腦損害過程中，Ca2+ 介...

膜片鉗芯片技術是繼細胞芯片之后的又一種嶄新的分析細胞電生理參數的芯片技術.由于該芯片除了具有傳統膜片鉗的高分辨和高準確性特點外,還具有高通量、自動化以及細胞多通道參數和細胞網絡參數在線和實時檢測等優點.因此,該芯片技術將很大促進細胞離子通道、細胞網絡傳導以及藥...

膜片鉗實驗實驗，記錄和分析數據準備工作就緒后即可進行實驗操作，數據記錄和分析。對電極持續施加一個1mV、10～50ms的階躍脈沖刺激，電極入水后電阻約4～6MΩ，此時在計算機屏幕顯示框中可看到測試脈沖產生的電流波形。開始時增益不宜設得太高，一般可在1～5mV/...