實(shí)驗(yàn)步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時(shí)不要扎破血管，打的結(jié)不要包進(jìn)太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進(jìn)血管，里面的針時(shí)會(huì)出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準(zhǔn)備給予灌流液1，同時(shí)剪開肝門靜脈，灌注時(shí)間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時(shí)間很重要，兩次灌注時(shí)嚴(yán)格保持針不要?jiǎng)樱駝t容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細(xì)胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

實(shí)驗(yàn)步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時(shí)不要扎破血管，打的結(jié)不要包進(jìn)太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進(jìn)血管，里面的針時(shí)會(huì)出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準(zhǔn)備給予灌流液1，同時(shí)剪開肝門靜脈，灌注時(shí)間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時(shí)間很重要，兩次灌注時(shí)嚴(yán)格保持針不要?jiǎng)樱駝t容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細(xì)胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

肝細(xì)胞作為細(xì)胞移植慢性肝衰竭的種子細(xì)胞以及作為藥物篩選的靶細(xì)胞，制備和培養(yǎng)大規(guī)模的、高活力的肝細(xì)胞是這些研究的基本環(huán)節(jié)。因此肝細(xì)胞的分離和培養(yǎng)技術(shù)正日益受到人們關(guān)注，成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。目前肝細(xì)胞的分離方法有機(jī)械分離法、螯合法和酶消化法等。機(jī)械法操作簡單，但分離獲得的肝細(xì)胞數(shù)量少、活性差。howard創(chuàng)建了膠原酶灌流法，seglen進(jìn)一步將這種方法發(fā)展為兩步灌流法。膠原酶灌流法得到的肝細(xì)胞數(shù)量和活性都得到提高，灌流法廣泛應(yīng)用于大鼠、小鼠、犬和兔等動(dòng)物。但此方法對肝組織塊的體積要求較大，不適用于手術(shù)切除的不規(guī)則小塊人肝組織，無法滿足基礎(chǔ)研究中對人肝細(xì)胞的需求。因此，急需建立一種簡單、...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細(xì)胞損傷和壞死，進(jìn)而引發(fā)炎癥和以細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積累為特征的傷口愈合反應(yīng)。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應(yīng)會(huì)迅速恢復(fù)正常組織穩(wěn)態(tài)和肝臟結(jié)構(gòu)。然而，如果損傷持續(xù)存在，隨之而來的慢性炎癥和ECM積累會(huì)超過肝臟再生的能力，導(dǎo)致纖維化并終導(dǎo)致肝硬化，這是一種預(yù)后不佳的肝臟疾病，也是發(fā)展為肝細(xì)胞(HCC)的主要危險(xiǎn)因素。原代肝細(xì)胞的服務(wù)價(jià)格更優(yōu)惠。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！北京兔肝細(xì)胞新西蘭大白兔原代肝細(xì)胞購買 培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞正常時(shí)是什么形狀的？大約要多久才能...

細(xì)胞傳代的基本原則代謝的有毒物質(zhì)會(huì)隨時(shí)間在細(xì)胞培養(yǎng)液中累積。當(dāng)擴(kuò)增細(xì)胞時(shí)，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細(xì)胞健康和監(jiān)測細(xì)胞擴(kuò)增情況以避免細(xì)胞生長過度。傳代的細(xì)胞通常分為三個(gè)主要類型：腫瘤細(xì)胞系、永生化細(xì)胞系、干細(xì)胞系。永生化細(xì)胞系是那些來自多細(xì)胞生物的細(xì)胞通過一些突變修飾改變了細(xì)胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細(xì)胞。與永生化的細(xì)胞系相反，干細(xì)胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細(xì)胞中分離得到。這些細(xì)胞,如您在短片中看到的人類胚胎干細(xì)胞,在適當(dāng)?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。細(xì)胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細(xì)胞,或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細(xì)胞系。貼壁細(xì)胞的...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細(xì)胞損傷和壞死，進(jìn)而引發(fā)炎癥和以細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積累為特征的傷口愈合反應(yīng)。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應(yīng)會(huì)迅速恢復(fù)正常組織穩(wěn)態(tài)和肝臟結(jié)構(gòu)。然而，如果損傷持續(xù)存在，隨之而來的慢性炎癥和ECM積累會(huì)超過肝臟再生的能力，導(dǎo)致纖維化并終導(dǎo)致肝硬化，這是一種預(yù)后不佳的肝臟疾病，也是發(fā)展為肝細(xì)胞(HCC)的主要危險(xiǎn)因素。上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞的優(yōu)勢。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！青海比格犬原代肝細(xì)胞購買 高活力原代小鼠肝細(xì)胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高...

現(xiàn)在您知道了如何傳代細(xì)胞，讓我們再來看看傳代的一些不同應(yīng)用。前面已經(jīng)提到，人胚胎干細(xì)胞是一類必須傳代的細(xì)胞。它們通常與小鼠成纖維細(xì)胞MEF共培養(yǎng)，后者能提供幫助干細(xì)胞保持其多能性的因子。生長于飼養(yǎng)細(xì)胞上的干細(xì)胞到了合適的發(fā)育階段時(shí)需挑出來。可用微型移液管挑出或用玻璃工具輕輕將其刮下然后接種于新的培養(yǎng)液中進(jìn)行擴(kuò)增。有一些細(xì)胞系對酶消化敏感，或者貼壁很緊無法使用胰酶處理來重懸。細(xì)胞刮常用來輕輕將細(xì)胞從培養(yǎng)板的底部刮下來。如果細(xì)胞貼壁特別緊，可加入培養(yǎng)液或適當(dāng)溶液后用血清吸管用力刮擦。使用該方法時(shí)要小心，細(xì)胞比較脆弱，容易在這種機(jī)械剝離的方法中受損。為了更快并可重復(fù)性的大量擴(kuò)增細(xì)胞到超過...

不能用手觸及已消毒器皿瓶口、瓶塞內(nèi)部，吸管前部等所有可能與細(xì)胞接觸的部分，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。開啟、關(guān)閉長有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過高燒死細(xì)胞。換液時(shí)傾倒廢液，瓶口不能接觸廢液缸，速度不能過快，防止廢液四濺。吹打細(xì)胞時(shí)，要注意邊角的細(xì)胞是否吹打下來。手或相對較臟的物品不能經(jīng)過開放的瓶口上，即不可以在開放容器上方操作。每次操作只處理一株細(xì)胞，以免造成細(xì)胞交叉污染。注意自身的安全，對于來自人源性或病毒的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如DMSO，并避免尖銳物品傷人等。從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)...

細(xì)胞傳代的基本原則代謝的有毒物質(zhì)會(huì)隨時(shí)間在細(xì)胞培養(yǎng)液中累積。當(dāng)擴(kuò)增細(xì)胞時(shí)，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細(xì)胞健康和監(jiān)測細(xì)胞擴(kuò)增情況以避免細(xì)胞生長過度。傳代的細(xì)胞通常分為三個(gè)主要類型：腫瘤細(xì)胞系、永生化細(xì)胞系、干細(xì)胞系。永生化細(xì)胞系是那些來自多細(xì)胞生物的細(xì)胞通過一些突變修飾改變了細(xì)胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細(xì)胞。與永生化的細(xì)胞系相反，干細(xì)胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細(xì)胞中分離得到。這些細(xì)胞,如您在短片中看到的人類胚胎干細(xì)胞,在適當(dāng)?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。細(xì)胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細(xì)胞,或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細(xì)胞系。貼壁細(xì)胞的...

然而，這些復(fù)雜的方法無法進(jìn)行大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)，在2D單層培養(yǎng)中維持分化的PHH依然重要。在這方面，近測試了一組化學(xué)物質(zhì)，而且鑒定了5種補(bǔ)充劑的一個(gè)組合（5C-medium，5C培養(yǎng)基），包括Forskolin（腺苷酸環(huán)化酶抑制劑），SB431542(TGF-β抑制劑)，IWP2（Wnt抑制劑），DAPT(Notch抑制劑)以及LDN193189(BMP抑制劑)，可以維持PHH分化狀態(tài)30天。不同于DMSO處理需要14天，F(xiàn)orskolin可以在72h內(nèi)誘導(dǎo)HepaRG細(xì)胞發(fā)生功能性極化。SB431542和DAPT也被用于在3D培養(yǎng)條件下使肝祖細(xì)胞樣細(xì)胞分化，并用HBV它們。盡管這些發(fā)現(xiàn)...

高活力原代小鼠肝細(xì)胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高純度原代小鼠肝細(xì)胞的分離和純化方法.方法對傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌注法進(jìn)行4個(gè)方面的優(yōu)化,主要包括選擇逆向灌流,將持續(xù)灌注法改為間斷灌注后夾閉門靜脈法,嚴(yán)格控制膠原酶消化時(shí)間和將分離的肝細(xì)胞懸液進(jìn)行低速Percoll單密度離心純化.分離后的肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng).肝細(xì)胞活力和得率用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測.結(jié)果新鮮分離的小鼠原代肝細(xì)胞活力能穩(wěn)定達(dá)到87%±3%,平均活細(xì)胞總數(shù)為8×10^5每克小鼠體重,絕大部分細(xì)胞在體外培養(yǎng)2h后貼壁生長.結(jié)論優(yōu)化后的肝細(xì)胞分離方法更為穩(wěn)定,有效,分離到的肝細(xì)胞具有高活力的優(yōu)點(diǎn). 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍十...

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過原代分離實(shí)驗(yàn)得到的原代細(xì)胞，與永生化的細(xì)胞系相比，能夠忠實(shí)模擬體內(nèi)生理狀態(tài)和功能，屬于“高階”的細(xì)胞模型，但是獲得高純度的原代細(xì)胞是一個(gè)非常艱巨的過程，科學(xué)合理的原代細(xì)胞提取和培養(yǎng)方法對于任何實(shí)驗(yàn)室都是一筆不可多得的財(cái)富。上次小編整理了脂肪原代細(xì)胞提取的教程，得到了大家的一致好評。應(yīng)廣大讀者要求，小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細(xì)胞的提取“密鑰”，趕緊收好~肝臟是人體“”代謝，在包括葡萄糖、蛋白質(zhì)和脂肪等多種物質(zhì)代謝過程中發(fā)揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過程，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)。肝臟中的細(xì)胞主要分為實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞兩類：實(shí)質(zhì)細(xì)胞的占比達(dá)到整個(gè)肝...

實(shí)驗(yàn)步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時(shí)不要扎破血管，打的結(jié)不要包進(jìn)太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進(jìn)血管，里面的針時(shí)會(huì)出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準(zhǔn)備給予灌流液1，同時(shí)剪開肝門靜脈，灌注時(shí)間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時(shí)間很重要，兩次灌注時(shí)嚴(yán)格保持針不要?jiǎng)樱駝t容易扎破血管）。翻開肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細(xì)胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)48h后，參照文獻(xiàn)[20-21]報(bào)道的方法誘導(dǎo)脂肪變性細(xì)胞模型。設(shè)置不同濃度(0～)的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，F(xiàn)FA混合物與含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基充分混勻后按濃度順序依次加入六孔板中，置于37℃、含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后油紅O染色，觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積情況，并采用全自動(dòng)生化分析儀檢測肝細(xì)胞內(nèi)TG含量。油紅O染色步驟：棄去六孔板中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗1～2次，加入油紅O固定液固定20～30min；棄去固定液，加入新鮮配制的油紅O染液染色10～20min；60%的異丙醇浸洗1～2min，三蒸水清洗2～3次直至無多余染液；...

肝臟原位灌注法：（為分離肝細(xì)胞的經(jīng)典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預(yù)熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內(nèi)達(dá)到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開腹腔，在門靜脈的肝外5mm處松松的放一個(gè)結(jié)扎線環(huán)，將血管套管插入至肝掌，結(jié)扎，快速切開肝下血管與面壓力過高，關(guān)注500ml無鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數(shù)秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續(xù)20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovit...

細(xì)胞傳代的基本原則代謝的有毒物質(zhì)會(huì)隨時(shí)間在細(xì)胞培養(yǎng)液中累積。當(dāng)擴(kuò)增細(xì)胞時(shí)，尤為重要的是經(jīng)常更換培養(yǎng)液以維持細(xì)胞健康和監(jiān)測細(xì)胞擴(kuò)增情況以避免細(xì)胞生長過度。傳代的細(xì)胞通常分為三個(gè)主要類型：腫瘤細(xì)胞系、永生化細(xì)胞系、干細(xì)胞系。永生化細(xì)胞系是那些來自多細(xì)胞生物的細(xì)胞通過一些突變修飾改變了細(xì)胞周期調(diào)控從而可以無限繁殖的細(xì)胞。與永生化的細(xì)胞系相反，干細(xì)胞系通常從成人和胚胎組織的可自我更新的多能細(xì)胞中分離得到。這些細(xì)胞,如您在短片中看到的人類胚胎干細(xì)胞,在適當(dāng)?shù)臈l件下也能無限傳代培養(yǎng)。細(xì)胞在優(yōu)化條件下可以懸浮培養(yǎng)，如從血液中分離到的永生化細(xì)胞,或者貼壁培養(yǎng)，如許多從組織中分離的細(xì)胞系。貼壁細(xì)胞的...