HE染色法,石蠟切片技術里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。去氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中稱藍色,所以細胞核被染成藍色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷的陽離子結合使胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明對比。伊紅是細胞漿的良好染料。由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色后,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。專業的HE染色服務平臺,南京英瀚斯生物。重慶質量好的HE染色外包
HE染色法,。蘇木精染液為堿 ,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色 ;伊紅為酸染料 ,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。而線粒體用HE染色不可見,活細胞通常要求活細胞近似無色線粒體需要用健那綠來染色,再在高倍鏡下觀察。從人或動物新鮮尸體上取下塊(一般厚度不超過0.5厘米)投入預先配好的固定液中(10%福爾馬林,Bouin氏固定液等)使、細胞的蛋白質變凝固,以防止細胞后的自溶或細菌的分解,從而保持細胞本來的形態結構。一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑,逐漸脫去塊中的水份。再將塊置于既溶于酒精,又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明,以二甲苯替換出塊的中酒精,才能浸蠟包埋。安徽靠譜的HE染色外包南京英瀚斯,專業的技術提供專業的HE染色服務。
HE染色原理1、細胞核染色的原理:蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。2、細胞漿染色的原理:伊紅是一種化學合成的酸性染料,在一定條件下可使細胞漿著色。細胞漿的主要成分是蛋白質,為兩性化合物,細胞漿的染色與染液的pH在胞漿蛋白質等電點(4.7—5.0)以下時,胞漿蛋白質以堿式電離,則細胞漿帶正電荷,就可被帶負電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負電荷的陰離子,與胞漿蛋白質帶正電荷的陽離子結合,使細胞漿著色,呈現紅色。
HE染色細胞漿染色原理:細胞漿內主要成分是蛋白質,為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系,當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時,大于蛋白質的等電點pH值,表現酸性電離,而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現時胞核也被染色,核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。HE染色結果如果使用計算機分析軟件分析?
HE染色全名蘇木精—伊紅染色法,屬于化學染色法,其主要依靠蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色。實驗過程:1、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自來水洗。2、蘇木素染色:切片入蘇木素染液染3-5min,自來水洗,分化液分化,自來水洗,返藍液返藍,流水沖洗。3、伊紅染色:切片依次入85%、95%的梯度酒精脫水各5min,入伊紅染液中染色5min。4、脫水封片:切片依次放入無水乙醇I5min-無水乙醇II5min-無水乙醇Ⅲ5min-二甲Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明,中性樹膠封片。5、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。結果判讀:細胞核呈藍色,細胞質呈紅色HE染色取材和樣本保存方式。廣西推薦的HE染色哪家好
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HE染色結果判讀:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍色,粘液呈灰藍色。細胞漿被伊紅染成深淺不同的粉紅色至桃紅色,胞漿內嗜酸性顆粒呈反光強的鮮紅色。膠原纖維呈淡粉紅色,彈力纖維呈亮粉紅色,紅血球呈橘紅色,蛋白性液體呈粉紅色。著色狀況與組織或細胞的種類有關,也隨其生活周期及病理變化而改變。例如,細胞在新生時期胞漿對伊紅著色較淡或輕度嗜堿,當其衰老時或發生退行性變則呈現嗜伊紅濃染。膠原纖維在老化和出現透明變性時,伊紅著色由淺變深。H-E染色評定標準:(1)切片完整,厚度4-6微米,厚薄均勻,無皺褶無刀痕;(2)染色核漿分明,紅藍適度,透明潔凈,封裱美觀。重慶質量好的HE染色外包