寧夏切片免疫組化外包

免疫組化的質量控制免疫組化的質量控制是確保實驗結果可靠性和重復性的關鍵步驟。質量控制包括實驗前的抗體驗證、實驗中的陽性對照和陰性對照，以及實驗后的結果評估。抗體驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞，確保實驗系統的有效性。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞，排除非特異性結合。結果評估是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估，確保實驗結果的可靠性。免疫組化的樣本保存要求是什么？寧夏切片免疫組化外包

細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟

1、選擇貼壁良好的細胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

英瀚斯生物，細胞、動物、臨床樣本免疫組化檢測都可完成！

7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

11、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 四川動物組織免疫組化怎么樣免疫組化結果分析是什么？

免疫組化結果背景染色較深的原因有哪些？

 （1）抗體濃度過高：一抗濃度過高是常見的原因之一。解決辦法是，每次使用新抗體前應當對其工作濃度進行測試，使每一抗體個體化，找到適合自己實驗室的理想工作濃度，既使是即用型的抗體也應如此，不能只簡單的按說明書進行染色。

（2）抗體孵育時間過長或溫度較高：解決辦法是，嚴格執行操作規程，比較好隨身佩帶報時表或報時鐘，及時提醒，避免因遺忘而造成時間延長。現在流行的二步法（Polymer）敏感性很高，要求一抗孵育的時間不是傳統的1小時，而是30分鐘，因此，要根據染色結果進行調整。 

（3）DAB變質和顯色時間太長：DAB比較好現用現配，如有沉渣應進行過濾后再用。配制好的DAB不應存放時間太長，因為在沒有酶的情況下，過氧化氫也會游離出氧原子與DAB產生反應而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里幾天后再用這種似乎節約的辦法是不可取的。DAB的顯色比較好在顯微鏡下監控，達到理想的染色程度時立即終止反應。但是當染**太多時或用染色機時，這樣做似乎不現實，但至少應對一些新的或少用的抗體顯色時進行監控，避免顯色時間過長。

英瀚斯專業實驗檢測，各類染色、免疫組化、免疫熒光等。

確定來源不明的轉移瘤的原發部位，臨床上免疫組化也可以進行操作。對于來源不明的轉移瘤，用免疫組化技術有助于確定惡性cancer的組織學來源，進一步確定原發部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性，而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細胞cancer;肌動蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫療及預后提供了依據。免疫組化失敗的原因？

免疫組化在什么情況下進行組織抗原修復，抗原修復的條件是什么？ 

（1）由于組織中部分抗原在甲醛或多聚甲醛固定過程中，發生了蛋白之間交聯及醛基的封閉作用，從而失去抗原性。通過抗原修復，使得細胞內抗原決定族重新暴露，提高抗原檢測率。

（2）修復方法從強到弱一般分為三種，高壓修復、微波修復、胰酶修復。修復液也分為若干種（具體的可以查閱相關資料，大量的：中性的、高pH的等）。

（3）微波修復，我們一般用6min*4次，效果不錯。

關于免疫組化的更多問題詳解，關注英瀚斯生物。 英瀚斯實驗外包，病理染色切片免疫組化，效率高！動物組織免疫組化注意事項

英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南！寧夏切片免疫組化外包

免疫組化結果中的假陰性是指所有抗體標記的切片均呈陰性，無陽性信號，假陰性結果不是真實的反應。導致假陰性結果的原因有:(1)抗原修復方法選擇不當，根據不同的抗原特點采用不同的修復方法，大多數抗體要求熱修復，熱修復又包括高壓修復、微波修復及煮沸熱修復;而對某些細胞內抗原和細胞間質抗原需要用酶消化，如表皮生長因子(EGFR)要求胃蛋白酶(Pepsin)消化，而Vimentin則不用修復;(2)一抗本身的問題:一抗效價降低或失效。在免疫組化中染色結果的假陰性會導致錯診或漏診，進而影響臨床診斷及延誤醫療。解決這一問題的可通過設立陽性對照，比較兩者染色結果。若陽性對照有表達，表明試劑和染色體系及實驗步驟均無問題;若陽性對照無表達，則檢測過程中某一試劑或某個步驟存在問題，應逐一查找原因。寧夏切片免疫組化外包