酶標記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致疾病作用，應注意防護。有條件者應使用不致疾病、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。ELISA屬固相，抗原、抗體的結合只在固相表面上發生。茂名ELISA試劑盒生產商
ELISA試劑盒的反應板過多造成洗板等待時間長。解決辦法：保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水特殊材料）上輕輕拍干； 合理安排，或多用幾臺洗板機。顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應避免接觸金屬器械?？赡茉蛉缂咏K止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。茂名ELISA試劑盒生產商ELISA試劑盒固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
洗滌在ELISA 試劑盒過程中雖不是一個反應步驟，但卻決定著實驗的成敗。ELSIA 就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以去除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質，以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的，而在洗滌時應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來。可以說在ELISA 操作中，洗滌是較主要的關鍵技術，應引起操作者的高度重視，操作者應嚴格按要求洗滌，不得馬虎。
試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標本較多時，要分批操作。ELISA試劑盒的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。
ELISA試劑盒每加一種試劑前需將其搖勻。在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反響時間到30min。反之，則減短反響時間。反響停止液為2M硫酸，防止接觸皮膚。不要運用過了有用日期的ELISA試劑盒；也不要運用過了有用期的試劑盒中的任何試劑，摻雜運用過了有用期的ELISA檢測試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交流運用不同批號試劑盒中的試劑。當然除了注意以上幾點外，選對ELISA試劑盒也很關鍵，可以很大降低實驗危險性。在ELISA試劑盒過程中不是反應聚，但卻是決定實驗成敗的關鍵。茂名ELISA試劑盒生產商
ELISA試劑盒的質量取決于其原料，也就是抗體對的質量。茂名ELISA試劑盒生產商
先將抗原結合到ELISA板上，隨后分兩步進行檢測：首先加入檢測抗體與抗原特異性結合，隨后加入酶標二抗檢測并利用底物顯色。與直接ELISA相比，間接ELISA用到酶標二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標記抗體，更經濟。間接ELISA還提供了更大的靈活性，因為不同的一抗能夠與單一標記的二抗一同使用。間接ELISA實驗的缺點是存在交叉反應的可能性（酶標二抗直接與抗原結合），可能會增加背景，同時與直接ELISA相比，間接ELISA實驗多了二抗孵育的步驟，實驗周期延長。茂名ELISA試劑盒生產商
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